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技术文章

小鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒 的间接法

点击次数:6400 发布时间:2021/3/2 14:29:52

 小鼠碳酸酐酶2(CA-2)elisa试剂盒的间接法:

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。
 
2.次日洗涤3次。
 
3.加定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后遍用DDW洗涤。
 
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
 
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
标本的保存
般说来,在 5 天内测定的标本可放置于 4℃,超过周测定的需低温冻存。 对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分标 本也可加入适当防腐剂,激素类标本需添加抑肽酶。
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原创作者:上海谷研实业有限公司

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