(1)标本溶血 要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其具有类过氧化物的活性,因此,在以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)为标记酶的ELISA测定中,如果血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的底物反应显色。
(2)标本被细菌污染 标本的采集及血清分离要注意尽量避免细菌污染。细菌菌体中除可能含有内源酶对测定产生非特异性干扰外,还可能对抗原抗体等蛋白产生分解作用。另外标本在保存中出现浑浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。
(3)标本贮存时间过长 标本在低温下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底加深、甚至出现假阳性结果。通常情况下血清标本可在2~8℃下保存l周,冷冻保存时间会更长,但对于抗体或抗原含量低的标本而言,则可能会因抗体掉价、抗原分解而出现假阴性结果。
(5)冷冻保存标本避免反复冻融 标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,使抗体效价跌落从而引起假阴性结果,ELISA试剂盒所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冻存。此外,标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩,分布不均,因此重新融解的标本必须混匀,但不要进行剧烈振荡,反复颠倒即可。
上面是ELISA产品管理的相关信息您都掌握好了吗?定要好好牢记哦,对您的科研实验定会有很大帮助呢!
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