大鼠肾小球内皮细胞提取物细胞冻存指导原则:

冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。与其他细胞培养操作一样，我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得*佳结果。 

1）在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意*佳冻存条件取决于所用细胞系。 

2）细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。

3）必须使用的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂

4）将冷冻的细胞于 -70°C 以下温度储存；温度高于 -50°C 时，冷冻的细胞将开始变质。 

5）必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存 

6）必须穿戴个人防护设备。 

7）所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。

在遵循上述冻存指导原则的基础上，我们还应特别注意以下几点以进一步优化细胞冻存的效果：

8）记录详尽：每次进行细胞冻存时，应详细记录细胞的来源、代数、冻存日期、冻存前细胞状态、冻存液成分及比例、降温程序及*终储存位置等信息。这些记录对于后续细胞的复苏、鉴定及实验结果的追溯至关重要。

9）定期检查：定期对储存于液氮或超低温冰箱中的细胞进行存活率检测，确保细胞质量未受影响。同时，检查液氮罐的液氮量，及时补充，避免细胞因温度波动而受损。

10）复苏准备：在计划使用冻存细胞前，提前准备好复苏所需的设备和试剂，如温水浴（控制在37°C左右）、新鲜培养基、离心管等，确保复苏过程迅速而高效，减少细胞在复苏过程中的损伤。

11）逐步复苏：复苏细胞时，应遵循“快融慢复”的原则，即细胞从液氮中取出后应迅速放入37°C温水中融化，但随后的离心、洗涤和重悬过程应轻柔且缓慢，以减少对细胞的物理应激。

12）后续监测：复苏后的细胞需进行一段时间的监测，包括细胞形态、生长速率、增殖潜力等，以确保其恢复至良好的生长状态，为后续实验提供可靠的细胞材料。

综上所述，严格遵守细胞冻存指导原则，并结合实际操作中的细节把控，将有助于提高细胞冻存的成功率，保障科研工作的顺利进行。

原创作者：上海谷研实业有限公司