细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢?没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?不罗嗦了，请看下文：

活力检查 – 千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!

形态检查 – 检查细胞的固有形态和生长行为。

好了，开始切入正题

冻存细胞：

补充新的培养液 – 在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。

在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度 ~5 x106 cells/ml (根据不同的细胞类型调整)

冻存液 – 用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择*合适的冻存液(常用的冻存液成分有):

– 5-10% DMSO – 注意确保DMSO不含有其他的毒性物质。

– 5-15% 甘油

– 如果细胞在无血清培养基内生长，应在50%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长24小时)内冻存和复苏。

在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过1.5ml.

程序降温是保证冻存细胞活性的关键，使用 Mr. Frosty(找生物注一种装置)保证降温速度为1°-3°C，置于-80°C冰箱内过夜，如果没有Mr. Frosty装置，可以使用实验室常见的泡沫盒、棉花等(原文是实验室尿布，呵呵，不知道是什么鸟)。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以*快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！

还有一个*重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题!

细胞复苏-正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：

当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要(找生物注国内这个方面做得非常不好吧)从液氮内转移冻存管至热的(温度高的)容器内，应在液氮内完成。应该与37℃水浴中快速溶解冻存的细胞，并保证冻存管盖子在水面之上以避免污染。当*小的冰块溶解后，用70%酒精擦拭冻存管，并迅速转移至新的已经预热的培养基内。观察细胞生长形态和生长比率。其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜，尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。

7432-28-2 20mg/支 五味子醇甲 Schisandrol A
58546-55-7 20mg/支 五味子酯乙 Schisantherin B
58546-56-8 20mg/支 五味子酯甲 Schisantherin A
"分子式：C23H28O7
分子量：416.47" 20mg/支 五味子醇乙 Schisandrol B
42553-65-1 20mg/支 西红花苷 Crocin
94238-00-3 20mg/支 西红花苷I Crocin I
55750-84-0 20mg/支 西红花苷II Crocin II
480-16-0；654055-01-3 20mg/支 桑色素 Morin hydrate
77-95-2 20mg/支 D-(-)-奎宁酸 D-(−)-Quinic acid