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公司新闻

荧光激发与检测对细胞形态及生理的影响

点击次数:1065发布时间:2018/9/14

      由于荧光激发与检测对细胞形态及生理的影响较小,因而当之无愧地成为研究细胞结构与功能的示踪方法。五花八门的细胞器荧光探针是细胞学研究中重要的一种工具,大概有几百种之多。说到荧光探针,Molecular Probes绝对是一块“谁与争锋”金字招牌,2003年被Invitrogen收归旗下。尽管宣传不多,但分子探针这一块的销售额还是随着细胞学研究的进展而节节攀升。没办法,跟着文献走,文献中尽是它。下面这张漂亮的图上标出的细胞器,Invitrogen都有相应的探针。

     线粒体是细胞的能量工厂。因其参与了细胞凋亡,这些年也成为研究的热门。线粒体的荧光探针主要有:JC-1、Rhodamine 123等,Invitrogen还推出专门的MitoTracker® 系列探针。

     JC-1是用得*多的。它在浓度或线粒体膜电位低时,以单体存在,激发波长为490 nm,发射波长为527 nm,呈绿色荧光。当浓度升高或线粒体膜电位升高时,JC-1形成J-聚体,呈橙色荧光,此时激发波长为490 nm,发射波长为590 nm。JC-1*重要的应用是检测活细胞内线粒体的膜电位,以及追踪凋亡细胞中的线粒体变化。

    Rhodamine 123是一种能渗透入细胞,带阳离子的荧光探针。它的激发波长为505 nm,发射波长为534 nm。活细胞摄取Rhodamine 123达到平衡的速度较快,只需5分钟,通过激光扫描共聚焦显微镜观察,即可见到线粒体被Rhodamine 123染成绿色。当细胞被反复冲洗时,Rhodamine 123通常不被细胞保留,但许多癌细胞可较长时间保留这种染料,因此,它有助于某些癌症的诊断。

     MitoTracker是细胞通透性的,只要与细胞简单孵育,就能被动渗透质膜,在有活性的线粒体中积累。一旦线粒体被标记,细胞就能用甲醛固定剂固定,一些MitoTracker探针能在固定之后保留在线粒体内。这对致病细胞格外有用。而一些探针在随后的去污剂处理后还能保留,这样就能用在免疫细胞化学或原位杂交中。尽管传统的线粒体探针如Rhodamine 123也很容易标记线粒体,但是一旦线粒体的膜电位损失,它们就很容易被洗掉。这就限制了某些应用。

 

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