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原代细胞的维持方法的介绍
点击次数:1045发布时间:2018/11/23
1、贴壁细胞(包括半贴壁细胞的换液)
贴壁细胞长成网状或基本单层时,由于营养缺乏,代谢产物增多,pH变酸,不适宜细胞生长,此时细胞还未长成单层,未达到饱和密度,仍需继续培养,因此,需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单,即弃去旧液,加入与原培养液相同的等量完全培养基。若希望细胞能在较长时间内能维持存活,但不需增殖,此时要换成含2%小牛血清的维持液。
2、悬浮细胞
凡经培养后只在细胞培养基中悬浮生长而不贴壁的细胞,需在倒置显微镜下方可观察到细胞的形态和生长现象,淋巴细胞的短期培养无需换液,但加入生长因子或有丝分裂源(PHA、PMA、COnA、PWM、LPS等)后,细胞不仅会发生转化而且会发生分裂繁殖,此时培养基中的营养成分并不能维持细胞的营养需求,加之代谢产物增多,pH变酸,细胞不适宜生长,需进行换液。白血病细胞或淋巴瘤细胞体外长期培养时,都需换液培养,待达到饱和密度时才能传代。换液时,只能采用半量换液的方式,千万不能采取倒去旧液加入新液的方式进行换液。半量换液的方法如下:
将原培养瓶竖起,在30分钟内,若细胞沉于瓶底,可用吸管轻轻吸去一半上清弃去,再加入等量的新鲜完全培养基。若细胞不能沉于瓶底,可吸出细胞悬液,采用低速离心(1000r/min 10min)弃去一半上清加入等量的新鲜完全培养基,混匀后再转入原瓶继续培养。
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