人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。

     首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰（标本的浓度，干扰色等）。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值*小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

      双波长检测的原理：在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收*多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。一般来说在ELISA操作中出现的黄颜色溶液，在450nm波长下会有的吸收值。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收*小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。在ELISA酶标仪中一般采用波长作为参照波长，以消除非特异性吸收以及底部的指纹等其他干扰。所以在做现代ELISA实验时，能选择双波长进行读数，可限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确性。