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中文名称：Rapamycin 自噬诱导剂，mTOR抑制剂
英文名称：Rapamycin(Sirolimus)

产品规格：1mg

CAS：53123-88-9

分子量：914.18

储存：-20℃，有效期36个月
实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

二氢根标准溶液1000mg/L,溶剂:水化原癌因Yes相关蛋白1抗体

熔体流动速率标准物质(聚烯) 流动速率:19.11g/10min原癌因酪氨蛋白激酶Yes1抗体

放射性环境分析标准物质 体：化原癌因酪氨蛋白激酶Yes1抗体

化标准物质 99.98%化原癌因酪氨蛋白激酶Yes1抗体

化标准物质 K:99.97%;Cl:100.00%化zeta相关蛋白70抗体

中3种酚系物混合标准溶液 2,4-二酚:50.1μg/mL,2,4,6-三化zeta相关蛋白70抗体

异辛烷/中PCB101标准溶液 10μg/g化斑联蛋白抗体

异辛烷/中PCB103溶液 10.0μg/g锌指蛋白924抗体

异辛烷/中PCB180溶液 10.0μg/g内脏异位相关蛋白/锌指蛋白203抗体

异辛烷/中PCB209溶液 10.0μg/g锌指蛋白913抗体

异辛烷/中PCB28标准溶液 10μg/g锌指蛋白450抗体

异辛烷/中PCB52溶液标准物质 15μg/g锌指蛋白20D3抗体

异辛烷中PCB118溶液 10μg/g锌指蛋白BED3抗体

异辛烷中PCB138溶液 10μg/g锌指蛋白ZBTB38抗体

异辛烷中PCB153溶液 10μg/g锌结合乙脱氢酶结构域蛋白2抗体
Rapamycin 自噬诱导剂，mTOR抑制剂组蛋白H2AX抗体Human BCL6B(B-cell CLL/lymphoma 6 member B protein) ELISA Kit纤维母生长因子受体1抗体流式组化

同源结构域转录因子HESX1抗体Human SPOCD1 ELISA Kit瘦素受体抗体流式组化

同源结构域转录因子HESX1抗体Human SPTBN1 ELISA Kit抗纳曲酮抗体流式组化IgG

同源盒蛋白HOX13抗体Human SPOCK1 ELISA KitDL-脯氨酸

同源盒转录因子8抗体Human SPTBN2 ELISA Kit吡嗪酰

人绒毛膜促性腺β亚基单抗Human SSTR5 ELISA Kit4-氯苯氧乙酸

人类状瘤病18 E6抗体Human SPPL2A ELISA Kit碱蓝6B钠盐

人类状瘤病16-E7抗体Human HDAC8(Histone deacetylase 8) ELISA Kit丁基琼脂糖凝胶4FF
注意事项

1. 微量试剂取用请离心集液。

2. 避光保存及使用。

3. 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。

4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。

5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。

6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。