实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

中文名称：可逆FAK和Pyk2激酶抑制剂(PF-562271)
英文名称：PF-562271

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

发货周期：1～3天

PF-562271是有效的ATP竞争性的可逆FAK和Pyk2激酶抑制剂，IC50分别为1.5和13nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：717907-75-0

纯度：99.36%

分子量：507.49

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
公司产品仅用于科研现货供应，质量有保证、价格优惠、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。

培养操作步骤：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

注意事项

1. 微量试剂取用请离心集液。

2. 避光保存及使用。

3. 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。

4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。

5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。

6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

碳化锆 99%,1μmhs-CRP(Human high sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit  人超敏C反应蛋白兔睾酮受体(TR)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化铈 20nm 球形，99.5%Tn- I (Human Troponin I ) ELISA Kit  人肌钙蛋白Ⅰ兔肌营养不良蛋白(DMD)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化镝 ≥99.99% metals basisSAA(Human Serum amyloid A) ELISA Kit  人血清淀粉样蛋白A兔I型胶原交联氨端肽(NTXI)酶联免疫吸附测定试剂盒  

氧化镝 40nm 球形，99.5%Hsp-60(Human Heat Shock Protein 60) ELISA Kit  人热休克蛋白60兔B活化因子 (BAFF/CD257/TNFSF13B)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化铒 99.9% metals basisHSP gp96(Human Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit  人热休克蛋白糖蛋白96兔黑素转铁蛋白(MFI2)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化铕 99.99% metals basisCT-1(Human cardiotrophln 1) ELISA Kit  人心肌营养素1兔粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)酶联免疫吸附测定试剂盒  

氧化钆 99.9% metals basisCP/CER(Human Ceruloplasmin) ELISA Kit  人铜蓝蛋白兔糖盏蛋白(GC)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化钆 99.99% metals basisHSP-90(Human Heat Shock Protein 90) ELISA Kit  人热休克蛋白90兔颗粒酶B(GzmB)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化钬 99.99% metals basisHSP-70(Human Heat Shock Protein 70) ELISA Kit  人热休克蛋白70兔核孔蛋白153kda(NUP153)酶联免疫吸附测定试剂盒

纳米氧化钬 99.9% metals basis,<100 nm particle size (BET)HSP-40(Human Heat Shock Protein 40) ELISA Kit  人热休克蛋白40兔辅肌动蛋白α3(ACTN3)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化镧 99.99% metals basisHSP-20(Human Heat Shock Protein 20) ELISA Kit  人热休克蛋白20兔弹性蛋白酶2B(ELA2B)酶联免疫吸附测定试剂盒  

氧化镧 99.999% metals basisMYS(Human Myosin) ELISA Kit  人肌球蛋白兔胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)酶联免疫吸附测定试剂盒

氧化镥  99.99% metals basisGS(Human Gelsolin) ELISA Kit  人凝溶胶蛋白兔补体因子B(CFB)酶联免疫吸附测定试剂盒

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