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Smo抑制剂(Jervine)
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产品数:22394
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:Smo抑制剂(Jervine)
英文名称:Jervine
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
发货周期:1~3天
Jervine(11-Ketocyclopamine)是甾体类生物碱,能阻断sonic hedgehog(Shh)信号通路,抑制Smo。
注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!
CAS号:469-59-0
别名:11-Ketocyclopamine
纯度:99.03%
分子量:425.6
储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. 避光保存及使用。
3. 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
酿酒酵母 2-(炔基)二酸二乙酯甘油三酯检测试剂盒
黄溶链霉 4-氯嘧啶盐酸盐肝癌衍生生长因子检测试剂盒
大豆慢生根瘤 三(1,3-二苯基-1,3-二酮基)(1,10-邻二氮杂菲铕(Ⅲ)肝配蛋白B3检测试剂盒
食砜节杆 4-乙酰基苯磺酰氯肝素辅因子Ⅱ检测试剂盒
雷公藤糖多孢 3-氨甲酸甲酯盐酸盐肝素结合性表皮生长因子检测试剂盒
黑根霉 4,5,6-三氯嘧啶肝癌结合蛋白TD26检测试剂盒
大豆慢生根瘤 Fmoc-D-4-氟苯氨酸肝核因子4α检测试剂盒
副猪嗜血杆 2,4-二(二氟甲基)苯肝生长因子检测试剂盒
草木樨中华根瘤 四丁基单醋酸鏻肝生长因子受体检测试剂盒
克雷伯氏杆 1-金刚烷肝脂肪酸结合蛋白检测试剂盒
弯头曲霉 3-甲氧基-4-氨基苯甲肝脂肪酸结合蛋白检测试剂盒
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产紫青霉 2-(4-溴苯基)-1H-咪唑干扰素调节因子检测试剂盒
东方伊萨酵母 雨蛙素干扰素调节因子4检测试剂盒
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