实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

中文名称：NF-κB抑制剂(Oleandrin)
英文名称：Oleandrin

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg

发货周期：1～3天

Oleandrin（一种毒性强心苷）在各种培养的细胞系（U937，SKOV3，人上皮细胞和T细胞）中抑制NF-κB活性，在PC3细胞系培养中诱导程序性细胞死亡中的。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：465-16-7

纯度：99.84%

分子量：576.72

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
公司产品仅用于科研现货供应，质量有保证、价格优惠、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。

培养操作步骤：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

注意事项

1. 微量试剂取用请离心集液。

2. 避光保存及使用。

3. 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。

4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。

5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。

6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

赭曲霉 3-基-4-异氧基苯甲酸甲酯EB病Rta蛋白检测试剂盒

纸葡萄穗霉 氟米松EB病Rta蛋白检测试剂盒

酿酒酵母 2,3-二氟-4-氧基苯酸异柠檬酸脱氢酶2检测试剂盒

德氏乳杆保加利亚亚种 5-氯吡-2-甲酰葡萄糖6磷酸异构酶检测试剂盒

疣青霉 2－－3-羧酸吡肝素结合蛋白检测试剂盒

中国平脐蠕孢 2.3-二氟-4-乙氧基苯酸Sal样蛋白4检测试剂盒

酿酒酵母 2,5-二(2-噻吩基)噻吩并[3,2-b]噻吩CD5分子检测试剂盒

美澳型核果褐腐病 2-甲基-5-硝基吡啶可溶性SCD14受体检测试剂盒

大肠埃希 达比加群酯羧酸酯酶1检测试剂盒

pCMV-HA(pCMV-HA-N) 3-氯-4-吡啶甲酸乙酯载脂蛋白L1检测试剂盒

格氏乳球 2-硝基间苯二甲酸AβpE3检测试剂盒

脱皮毛球马勃* 3-氨基-4-哒羧酸硬脂酰辅酶A去饱和酶1检测试剂盒

金灰青霉 2-氯-5-溴-3-三氟甲基吡啶硬脂酰辅酶A去饱和酶1检测试剂盒

香菇 3-氟-4-氧代-1-甲酸叔丁酯Δ6去饱和酶检测试剂盒

 5-氨基-3-氟苯核因子-κB亚基p65亲和肽检测试剂盒
NF-κB抑制剂(Oleandrin)小鼠网膜素Anti-OR14J1 Antibody人基质金属蛋白酶7（MMP-7）elisa定量检测试剂盒

大鼠生长释放肽ghrelinAnti-OR1D5 Antibody人巨噬移动抑制因子（MIF）elisa定量检测试剂盒

人神经营养因子3Anti-OR1D2 Antibody人滑行蛋白β（TXLNb）elisa定量检测试剂盒

人的神经生长因子Anti-OR1B1 Antibody人降钙素原（PCT）elisa定量检测试剂盒

小鼠孤腓肽Anti-OR1D5 Antibody人干扰素调节因子5（IRF5）elisa定量检测试剂盒

大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂Anti-OR1L6 Antibody人沉默调节蛋白1（SIRT1）elisa定量检测试剂盒

人的神经生长因子-βAnti-OR1S2 Antibody人环氧合酶-2受体（COX-2R）elisa定量检测试剂盒

人巨噬炎性蛋白3βAnti-OR1N1 Antibody人甲状旁腺（PTH）elisa定量检测试剂盒