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病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)
英文名称:Virus DNA/RNA Extraction Kit In ten minutes
产品规格:50T
产品货号:GOY-F9813
本试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从粪便、淋巴液、血清、血浆样本中纯化出高纯度的病毒DNA/RNA。本试剂盒操作简单、快速,10分钟即可获得高纯度DNA或RNA,可应用于各种病毒DNA/RNA核酸提取,如各HCV、HIV、HPV、动物致病性病毒等。应用本试剂盒提取的DNA/RNA可直接用于反转录、One-Step RT-PCR、文库构建等多种分子生物学实验。 储存:室温避光保存,可保存2年。 1.本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇,无需单独添加。 2.Virus DNA/RNA LB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。 3.蛋白酶K(20mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6个月),其它组分储存于室温。 特点: 1.仅需10分钟即得到高质量病毒DNA和RNA。 2.操作简单,无有机抽提或乙醇沉淀。 3.重复性,产量高。 4.完全去除污染物和抑制剂,方便下游应用。 操作方法: 1.在1.5mL离心管(自备)中加入200μL病毒液(粪便提取液、血清、血浆等),加入50μL Virus DNA/RNA LB1和 20μL 蛋白酶 K,漩涡混合均匀,室温消化 5分钟。 2.消化完毕后,向上述样本中加入700μL Virus DNA/RNABB2,漩涡混合 1分钟。 3.将上述混合液全部倒入到吸附柱中,13000rpm离心1分钟。 4.倒掉废液。向吸附柱中加入500μL Washing Buffer,13000rpm离心15s。重复此步骤一次。 5.将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1分钟,将残留的乙醇彻底甩干。 6.将吸附柱芯放入到 1.5mL RNase-Free 收集管中,向吸附柱芯中加入30~80μL Nuclease Free,13000rpm离心1分钟,洗脱液即为 DNA/RNA 产物,冷冻保存。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
尿调蛋白(UMOD)酶联免疫试剂盒乙二乙 standard for GC, ≥99.5% (GC)衣康酸 AR,99.8%双三氟乙酰(>98.0%(N))
病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟)Gefitinib