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病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
英文名称:Viral DNA/RNA Kit
产品规格:50T
产品货号:GOY-F9867
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取病毒RNA和DNA。本品无需使用、等有机溶剂抽提,操作简单。本试剂盒采用独特的缓冲体系使裂解液中的病毒核酸高效特异地结合在硅胶质离心吸附柱上,PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步有效的漂洗步骤有效去除,后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度的病毒核酸。纯化的病毒核酸不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可直接用于PCR、RT-PCR、Real-Time PCR、印迹实验等。 保存条件:RT 自备试剂: 无水乙醇。 实验准备及重要注意事项: 1、向蛋白酶K中加入1.25ml蛋白酶K储存液使其溶解,-20℃保存。 配制好的蛋白酶K勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。勿将蛋白酶K直接加入到Buffer GL中。 2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA段较小且提取量下降。 3、血清或血浆避免反复冻融,反复冻融会导致蛋白变性或产生沉淀,减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。 4、第yi次使用应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。 5、使用请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
核苷酸还原酶M1(RRM1)酶联免疫试剂盒异硫酸荧光素 96%十四 CP,95%L-高精氨酸盐酸盐
病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒1-Methyl-5-nitro-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester
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