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DNA/RNA/Protein提取试剂盒
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:DNA/RNA/Protein提取试剂盒
英文名称:AllPure DNA/RNA/Protein Kit
产品规格:50T
产品货号:GOY-F9869
本试剂盒适用于从同一细胞或组织样本中同时分离纯化基因组DNA、总RNA和总蛋白。本产品无需将样品分为3份来分别提取DNA,RNA和蛋白质,也无需先将纯化后的总核酸分为两份后再分别纯化DNA和RNA,因此可大限度的回收DNA,RNA和蛋白质,可以用于小量样品、珍稀样品的核酸和蛋白纯化。纯化后的DNA、RNA和蛋白质可被单独洗脱,可直接应用于下游多种分子生物学操作。本试剂盒中不包含和等有毒物质,无需乙醇沉淀,操作简单、快捷。提取的基因组DNA可用于PCR、Real-time PCR、Southern Blot、Dot Blot、比较基因组杂交(CGH)、基因分析和SNP分析;总RNA可应用于RT-PCR、cDNA的合成、Nothern Blot、Dot Blot和基因芯片等实验;总蛋白可应用于电泳和WesternBlot等。 保存条件:RT 自备试剂: β-巯基乙醇(新开封或提取RNA用)、70%乙醇(用无RNase的水配制)、无水乙醇。 实验准备及重要注意事项: 1、预防RNase污染,应注意以下几方面: 1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。 2)玻璃器皿应在使用于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。 3)配制溶液应使用无RNase的水。 4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。 2、样品应避免反复冻融,否则影响提取DNA、RNA和蛋白质的质量。样品在Buffer RL中,可于-70℃保存一个月。 3、Buffer RL在使用请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RL加10μL β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。 4、第yi次使用应按照试剂瓶标签的说明在Buffer RW2、Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。 5、使用请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请置于56℃水浴重新溶解。 6、所有离心步骤均使用台式离心机,室温下进行。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
含PR域蛋白10(PRDM10)酶联免疫试剂盒三盐酸盐 98%N-CBZ-羟脯氨酸甲酯 95%D-鸟氨酸盐酸盐
DNA/RNA/Protein提取试剂盒3-Aminoadamantan-1-ol
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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