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多重PCR试剂盒
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详细内容
中文名称:多重PCR试剂盒
英文名称:BalbMulti Multiplex PCR Kit
产品规格:100T|500T
产品货号:GOY-F10729
本试剂盒是一种高效、高特异性和高灵敏度的适用于对多个(可以过20个)目标DNA段同时进行非常均衡的PCR扩增的试剂盒。并且本产品不仅可以用于普通的多重PCR,更可以用于全血、血清或植物样品的直接PCR,便于直接用于血液样品中细菌和病毒感染、基因突变等的多重PCR检测,或者用于植物样品的基因突变、微生物感染等的多重PCR检测。 多重PCR是一种通过单个PCR反应同时对至少两个或多个DNA段进行扩增的PCR技术。目该技术已被广泛应用于科学研究、疾病诊断和法庭或诊断性的基因分型(Genotyping)等多个域。该技术还可以被用于以cDNA为模板的基因定量或半定量的表达分析,其特别适合于各种动植物、真菌、细菌或病毒等微量样品进行多基因检测,具备高特异性和高灵敏度的突出优点。 产品特点: 本产品多重扩增性能优越。 本试剂盒实测可以轻松实现15个目标DNA段的同时并且非常均衡的高效、高特异性和高灵敏度扩增(参考图1)。对于低至1pg的模板量,也可以通过仅30个PCR循环而被很好地扩增(参考图1)。普通的PCR试剂盒会由于PCR扩增时引物和模板的偏好性,对于不同的引物和不同的模板会产生不同的扩增效率,导致部分片段容易被扩增,而部分片段较难被扩增。本试剂盒使用了通过精心筛选和突变优化的非常适合用于多重PCR的DNA聚合酶BalbMulti DNA polymerase和反复优化的配套缓冲液,确保可以实现多个目标DNA段的高效、高特异性和高灵敏度的均衡扩增。 保存:-20℃ |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
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