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RF elisa试剂盒试剂配制

点击次数:1907 发布时间:2023/10/30 23:00:17

 RF elisa试剂盒试剂配制

  1、 标准品
  (1) 从试剂盒中取出一支标准品,于6000-10000rpm 离心30 。用1ml 样本稀释液溶解,并用吸头对准冻存管底部反复吸打5 次以助溶解,充分混匀得到标准品S7,放置备用。
  (2) 取7 个1.5 ml 离心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl 样本稀释液。吸取250μl 标准品S7 到*个离心管中(S6),轻轻吹打混匀。从S6 中吸取250μl 到第二个EP 管中(S5),轻轻吹打混匀。以此类推进行标准品的倍比稀释。S0 为样本稀释液。
  2、 洗液工作液浓洗涤液按1:25倍用去离子水进行稀释。例如用量筒量取240ml去离子水,倒入烧杯或其他洁净容器中,再量取10ml浓洗涤液,均匀加入,搅拌混匀,在临用配妥。浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
  3、 生物素标记抗体工作液生物素标记抗体液按1:100倍用生物素标记抗体稀释液进行稀释。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液,轻轻混匀,在临用10分钟内配妥。
  4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液辣根过氧化物酶标记亲和素按1:100倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液,轻轻混匀,在临用10分钟内配妥。
实验流程:
1. 实验标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。

原创作者:上海谷研实业有限公司

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