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人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa试剂盒说明书

点击次数: 118发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海谷研实业有限公司
  • 上传时间: 2022/5/6 14:19:46
  • 文件大小: 13KB
  • 文件类型: docx
  • 所属分类: 其它资料
  • 下载次数: 27次
  • 查看次数: 118

资料简介:

人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa试剂盒说明书

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:

1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2、研究抗酶抗体的合成。

3、显现微量的免疫沉淀反应。

4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

组成 :

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存

说明书 1份 1份

封板膜 2片(48) 2片(96)

密封袋 1个 1个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品 0.3ml×6瓶 0.3ml×6瓶 2-8℃保存

标准品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

检测抗体-HRP 5ml×1瓶 10ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

20*洗涤缓冲液 25ml×1瓶 15ml×1瓶 2-8℃保存


需自备的设备及试剂:

1.450±10nm滤光片酶标仪(建议仪器使用预热)

2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.

3.Eppendorf 移液器.

4.蒸馏水或去离子水.

5.脱脂棉吸水纸.

6.37℃恒温箱.

7.100ml和1000ml量筒.

8.准备若干个标准品稀释管.


注意事项

1.试剂准备:所有试剂都必须在使用达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性;一般加样时间控制在10分钟内,如果样本数量过多,可使用多道移液器。

3.孵育:样品要在密闭的容器内进行孵育,严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4.洗涤:洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,同时要消除板底残留的液体和手指痕迹,避免影响zui后的酶标仪读数。

5.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,10分钟左右),如果颜色较深,请提加入终止液终止反应。

6.建议实验预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。

7.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。


操作步骤

1. 取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。

2. 取出酶标板,按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入50μl的样品,空白对照加入50μl的蒸馏水;

4. 在样品孔中加入10μl的生物素;(不含空白对照孔,切忌:生物素只加样品孔!)

5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)

6. 将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)

7. 充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)

8. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干;

9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔)

10. 20-25℃下避光反应15分钟;

11.各孔加入50μl终止液,终止反应;

结果判断

1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;

2. 以OD值为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,绘制曲线图;

3. 根据样品的OD值查找对应的浓度范围;

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