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分享菌体生物特性结果

点击次数:1060发布时间:2018/1/19

噬菌体对紫外线具有很强的抵抗力,而且分枝杆菌噬菌体对氯仿温度都非常敏感。同时还发现Guo1 与分枝杆菌噬菌体G 群具有明显的同源性。

1、一般特性Guo1 具有双链环状DNA基因组,长度为40086 nt,碱基组成:A=5 789,C=13 375,G=13 420, T=7 502,G+C 含量为 66.84%,这与分枝杆菌噬菌体G群的G+C 含量很相近。

2、 启动子序列和串联重复序列预测结果考虑到启动子位于结构基因的上游以及基因 的分布,对 Promoter predictions 软件预测出的具有 启动子结构特征的区中,推测出 Guo1 基因组可能的7个启动子区,见表1;TRF 软件预测出3串联重复序列。

3. 噬菌体 Guo1 的编码基因预测分析 Glimmer 软件预测出 59 个编码基因(表 3),共3 种不同的起始密码子,其中51 个ATG,7 个GTG 和1个TTG;Guo1 基因组的推定基因中,*长的编码基因是基因 28 (4 014 nt),编码卷尺蛋白, *小的编基因是基因4 (153 nt),编码的蛋白质功能不明,除 5个编码基因位于正链外,其余的编码基因都位于负链;结构基因:基因 41 和 42 编码 入门蛋白,基因 21、22、23、24、25、26和27 编码尾 部蛋白,基因28 编码卷尺蛋白,基因37 编码衣壳蛋白;裂解酶系统:基因16和基因17分别编码裂解酶B和裂解酶 A;整合酶系统:基因12 编码整合酶,基因10 编码阻遏酶;基因43 编码末端酶; 其中11个推定基因未匹配到相应的基因功能。

4. 系统进化树构建Guo1全基因组序列BLAST 比对发现:Guo1 与分枝杆菌噬菌体G群具有明显的同源性,基因序列覆盖率大于95%,一致性大于98%,E 值为0 噬菌体有14 株,对14 株相似性高的噬菌体构建 系统进化树分析(图 1)

Guo1 亲缘较近的是Leo、BO4 和DNAⅢ,这3 株噬菌体均由本课题组完成 测序和基因初步分析,已证实为G群噬菌体且噬菌体Liefie、Angel、Halo、HopeBPs、Avrafan 均为 G 群噬菌体,表明噬菌体Guo1 应该归为分枝杆菌噬菌体G 群。
5. 生物学特性分析

5.1 *佳感染复数测定:按照感染复数 10−3 、 10−2 、10−1 、1、101 、102 的比例加入噬菌体和宿主菌双层琼脂培养24 h 后,测定噬菌体滴度,结果见表4。当 MOI=10−2 时,产出的噬菌体数量*多,因 此推断*佳感染复数为 0.01。

5.2 一步生长曲线的绘制:由图2中的噬菌体一 部生长曲线可以看出:分枝杆菌噬菌体Guo1感染宿主菌的潜伏期约为120min,裂解期约为120min,240 min后进入平台期,噬菌体的滴度不再增加,裂解量约为 47 个。

5.3 噬菌体对紫外线照射的抵抗力:图3表明噬菌体对紫外线具有很强的抵抗力,在经历开始30 min 的大幅下降后,存活率上升并维持在70% 长达30 min;60min 时存活率又短暂下降,在75 min 时开开始上升,至90 min 时,仍有62%的存活率。

5.4 噬菌体对氯仿的敏感性:噬菌体中加入氯仿作用10 min后,与加ddH2O 的对照组相比滴度下降明显,存活率仅为56%,表明噬菌体对氯仿敏感。

5.5 噬菌体对酒精的抵抗力:噬菌体中加入酒精作用10 min 后,进行双层平板测滴度,未出现菌斑;加ddH2O 的对照组,稀释至10−5 仍有69 个噬菌斑,表明噬菌体在10 min 内就可以被75%酒精灭活。

5.6 温度对噬菌体的影响:图4 表明噬菌体对温度很敏感,*适温度为 37 °C,在高于或低于温度时,噬菌体的浓度都会明显降低,在60 °C 处理30 min 噬菌体就完全失活;除37 °C 时处理时间 对噬菌体滴度影响较小外,在其他温度下,噬菌体处理30 min 后的滴度都要略高于60 min。

Icariin HPLC≥98% 淫羊藿苷 20mg/支
Naringin HPLC≥98% 柚皮苷 20mg/支
Naringenin HPLC≥98% 柚皮素 20mg/支
Proanthocyanidins UV≥95% 原花青素 20mg/支
Bergenin HPLC≥98% 岩白菜素 20mg/支
Sinomenine HPLC≥98% 盐酸青藤碱 20mg/支
Berberine hydrochloride HPLC≥98% 盐酸小檗碱(黄连素) 20mg/支
Coptisine HPLC≥98% 黄连碱 20mg/支
 

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