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细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)细胞内总LDH的检测

点击次数:973发布时间:2020/7/9

 细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)细胞内总LDH的检测

a.细胞毒性检测:根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中,使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理,并设置适当对照。药物刺激完毕后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清,加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀),适当摇晃培养板混匀,然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl,加入到一新的96孔板相应孔中,随即进行样品测定。
b.细胞增殖检测:根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中,使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的药物刺激细胞,并设置适当对照。药物刺激完毕后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清,加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀),适当摇晃混匀,然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔上清液120μl,加入到一新的96孔板相应孔中,随即进行样品测定。
  注:LDH释放检测更加常用一些,细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
注意事项:
1.冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活,4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
2.如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶,由于血清含有乳酸脱氢酶,建议血清的使用浓度不要超过1%,并使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清,在检测时一定要设置没有细胞,但加入了相同体积培养液的对照孔,以用于消除背景。
3.细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大,都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
4.如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量,用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
 
储存条件:-20℃,有效期一年。

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