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C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纤维细胞)

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2022/5/24 10:23:49更新时间:2024/8/20 23:53:57

产品摘要:C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纤维细胞)公司现货出售的商品: 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cardiotrophin-1 0.78-50 ng/mL 人脂质转运蛋白(CETP)ELISA试剂盒 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Cholesteryl ester transfer protein 0.

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培养基

蛋白/抗体

生化试剂盒

细胞

生物菌种

荧光定量PCR试剂盒

生化检测试剂盒

质粒

试剂盒

生化试剂

PCR检测试剂盒

elisa试剂盒

ATCC\CMCC标准菌株

标准品

ATCC细胞

RNA/DNA提取

elisa酶联免疫检测试剂盒

详细内容

 产品信息:
产品名称:C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纤维细胞)
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
货号:GOY-01X0323
分类:细胞系
产品详细介绍:
名称C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纤维细胞)
别称C3H/10T1/2-clone8; C3H/10T1/2 CL8; C3H10T1/2CL8; 10T1/2; C3H10T1-2; C3H10T1/2; C3H-10T1/2; C3H 10T1/2; C3H/10T1/2
种属小鼠
年龄(性别)胚胎
组织来源胚胎
生长特性贴壁细胞
细胞形态成纤维细胞样
背景描述C3H/10T1/2, Clone 8细胞是由C·Reznikoff等人于1972从C3H系小鼠胚胎细胞分离。C3H/10T1/2, Clone 8细胞对过度长满的细胞有丝分裂抑制非常敏感,在同源小鼠中不产生肿瘤,无自然转化的背景;C3H/10T1/2, Clone 8细胞也不含明显内源性转化鼠类白血病或肉瘤病毒。
生物安全等1
生长培养基MEM+10% FBS+1% P/S
推荐传代比例1:2-1:4
推荐换液频率2~3次/周
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
致瘤性No, in immunosuppressed mice. Yes, in semisolid medium.
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
 

操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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200U GpC 甲基转移酶 (M.CviPI) GpC Methyltranferase (M.CviPI) -20℃保存
200U T4聚核苷酸激酶 T4 Polynucleotide Kinase -20℃保存
C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纤维细胞)500U 热敏磷酸酶 Antarctic Phosphatase -20℃保存
500U 碱性磷酸酶,偶联 Alkaline Phosphatase,Conjugation Grade 4℃保存
100mg 辣根过氧化物酶,偶联 Horseradish Peroxidase,Conjugation Grade -20℃保存
25U 碱性磷酸酶, Alkaline Phosphatase,E.coli -20℃保存
500U 碱性磷酸酶,牛小肠 Alkaline Phosphatase,Calf Intestinal -20℃保存
300U 虾碱性磷酸酶 Shrimp Alkaline Phosphatase  -20℃保存
250U 无机焦磷酸酶,热稳定 Inorganic Pyrophosphatase,Thermostable -20℃保存
10U 无机焦磷酸酶(酵母) Pyrophosphatase, Inorganic(yeast) -20℃保存
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