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HPAF-II (人胰腺癌细胞)

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2022/5/25 11:12:57更新时间:2024/8/20 23:54:11

产品摘要:HPAF-II (人胰腺癌细胞) 公司现货出售的商品: 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Interferon alpha-inducible protein 6 0.156-10 ng/mL 人Ras三磷酸鸟苷酶激活样蛋白1ELISA试剂盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ras GTPase-activating-li

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培养基

蛋白/抗体

生化试剂盒

细胞

生物菌种

荧光定量PCR试剂盒

生化检测试剂盒

质粒

试剂盒

生化试剂

PCR检测试剂盒

elisa试剂盒

ATCC\CMCC标准菌株

标准品

ATCC细胞

RNA/DNA提取

elisa酶联免疫检测试剂盒

详细内容

实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品信息:
产品名称:HPAF-II (人胰腺癌细胞) 
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
货号:GOY-01X0597
分类:细胞系
产品详细介绍:
名称HPAF-II (人胰腺癌细胞) 
别称HPAF II; HPAFII; HPAF-2; HPAF2; HPAF/CD18; CD18/HPAF; HPAF-II/CD18; CD-18; CD18; CD 18
种属人类
年龄(性别)男性,44岁
组织来源胰腺癌
生长特性贴壁细胞
细胞形态上皮细胞样
背景描述HPAF-II is a human pancreatic adenocarcinoma cell line derived from peritoneal ascitic fluid of a 44 year old Caucasian male with primary pancreatic adenocarcinoma and metastases to the liver, diaphragm and lymph nodes.-
生物安全等1
生长培养基MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S
推荐传代比例1:2-1:3
推荐换液频率2~3次/周
倍增时间~26小时 (PubMed=2734279); 70小时 (PubMed=25984343)
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃

实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
 

操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
人大隐静脉内皮细胞完全培养基S-180(小鼠肉瘤细胞)
葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum戊糖杆菌 Lactobacillus pentosus
Escherichia coli毛柄金钱菌(金针菇) Flammulina velutipes
Chang liver (CCL13) (人张氏肝细胞)三七根腐病菌 Fusarium solani
酒假丝酵母 Candida kefyrIV型胶原酶(含10mL酶解缓冲液)
豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum植物杆菌 Lactobacillus plantarum
MGC80-3(MGC-803)人胃细胞大丽轮枝菌 Verticillium dahliea Kleb
地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformisEGFP标签蛋白裂解液
青霉菌 Penicillium sp.酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人肠微血管内皮细胞完全培养基淡天蓝链霉菌 Streptomyces coerulesscens
普通变形杆菌 Proteus vulgaris蟾毒灵
500mL Blotto-Tween in PBS   Blotto-Tween in PBS   常温保存
500mL Blotto-Tween in PBS with azide   Blotto-Tween in PBS with azide   常温保存
HPAF-II (人胰腺癌细胞) 500mL Blotto-Tween in TBS   Blotto-Tween in TBS   常温保存
500mL Blotto-Tween in TBS with azide  Blotto-Tween in TBS with azide  常温保存
250mL Borate Buffer(硼酸盐缓冲液),0.5M,pH8.0  Borate Buffer,0.5M,pH8.0  常温保存
250mL Borate Buffer(硼酸盐缓冲液),0.5M,pH8.5  Borate Buffer,0.5M,pH8.5  常温保存
250mL Borate Buffer(硼酸盐缓冲液),0.5M,pH9.0  Borate Buffer,0.5M,pH9.0  常温保存
250mL Borate Buffer(硼酸盐缓冲液),0.5M,pH9.5  Borate Buffer,0.5M,pH9.5  常温保存
500mL Borate Buffered Saline,5X, pH7.0  Borate Buffered Saline,5X, pH7.0  常温保存
25mL Bovine Gamma Globulin Solution,1mg/mL Bovine Gamma Globulin Solution,1mg/mL 常温保存

热门标签:HPAF-II (人胰腺癌细胞) 

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