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辅酶ⅠNAD(H)含量可见分光光度法检测试剂盒
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elisa酶联免疫检测试剂盒
详细内容
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
辅酶ⅠNAD(H)含量可见分光光度法检测试剂盒 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | GOY-01S6322 |
测定意义 辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。 测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。 需自备的仪器和用品 可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
提取液:液体×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加入2.6mL试剂一,充分震荡溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加入2.6mL试剂一,充分震荡溶解。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清液待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
二、测定操作:
1.分光光度计预热30 min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸馏水、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4.测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三,,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3 。
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