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线粒体柠檬酸(MCA）含量微量法检测试剂盒

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价格：￥电议

型号：原产地：中国大陆发布时间：2022/6/10 14:02:19更新时间：2024/8/20 23:54:25

产品摘要：线粒体柠檬酸(MCA）含量微量法检测试剂盒正在促销的相关产品：1 管 SURE SURE E.coli Strain -80℃保存2 ug pSecTag 2A pSecTag 2A 低温运输，-20℃保存50次柱式植物RNA-DNA双提试剂盒 2 ug pFUW pFUW 低温运输，-20℃保存

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基本信息：

用途范围：仅供科研研究实验

品牌：谷研

规格：100管/96样

货号：GOY-01S6583

是否进口：否

产品名称：线粒体柠檬酸(MCA）含量微量法检测试剂盒

检测方法：微量法

产品报价：请咨询在线销售人员

商品介绍：

测定意义:

CA是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理：

CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。

产品优点如下：
1、快速简便：双试剂，直接操作，快速、简便。
2、取样量微：需要的样本量是羟胺法的1/10。
3、灵敏度高：检测线0.5U/ml，是羟胺法5倍，邻苯三酚法的200倍
4、稳定性好：批内CV=5.50%,批间CV=3.32%，试剂盒2～8℃存放3个月有效。
5、再现性好：变异系数CV=1.2%。
6、回收试验： X =102.3%。
7、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。且特异性强，不受类SOD物质的干扰
8、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、效果均佳。
实验方法学：

一、肝素的配制：
市售肝素冻干粉140单位/mg，1克瓶装，每瓶140，000单位，称取0.1克肝素冻干粉，加生理盐水5ml，配成2800单位/ml。取50～100μl湿润管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不会凝固。老鼠血易凝固，所以好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉，加3ml生理盐水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制备：取0.1克肝素冻干粉，加2.5ml生理盐水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，湿润管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），横向转动，每隔5～10分钟转动一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集：

全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1～2小时，直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。

选择抗凝的注意点：
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。

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注意事项：
1、试剂二为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用（10μl试剂二原液+60μl蒸馏水）。
4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？
对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是（1）试剂二或试剂四没有现配现用；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。
若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

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