1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-5743体液HCV(HEPATITIS VIRUS C)病毒定量PCR扩增检测试剂盒M8013120次
shgoy-5744HCV(HEPATITIS VIRUS C)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒M801322次
shgoy-5745通用型HCV亚型(HEPATITIS VIRUS C)病毒定性检测试剂盒(1a、1b、2a、2b、3a、3b)M8013320次
shgoy-5746通用型HCV亚型(HEPATITIS VIRUS C)病毒定量PCR扩增检测试剂盒(1a、1b、2a、2b、3a、3b)M8013420次
shgoy-5747通用型科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定性检测试剂盒M8013520次
shgoy-5748细胞科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定性检测试剂盒M8013620次
shgoy-5749组织科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定性检测试剂盒M8013720次
shgoy-5750体液科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定性检测试剂盒M8013820次
shgoy-5751通用型科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定量PCR扩增检测试剂盒M8013920次
shgoy-5752细胞科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定量PCR扩增检测试剂盒M8014020次
shgoy-5753组织科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定量PCR扩增检测试剂盒M8014120次
shgoy-5754体液科萨基病毒A(Coxsackievirus A)定量PCR扩增检测试剂盒M8014220次
shgoy-5755通用型科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定性检测试剂盒M8014320次
shgoy-5756细胞科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定性检测试剂盒M8014420次
shgoy-5757组织科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定性检测试剂盒M8014520次
shgoy-5758体液科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定性检测试剂盒M8014620次
shgoy-5759通用型科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定量PCR扩增检测试剂盒M8014720次
shgoy-5760细胞科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定量PCR扩增检测试剂盒M8014820次
shgoy-5761组织科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定量PCR扩增检测试剂盒M8014920次
shgoy-5762体液科萨基病毒B(Coxsackievirus B)定量PCR扩增检测试剂盒M8015020次
shgoy-5763通用型人体鼻病毒(rhinovirus)定性检测试剂盒M8015120次
shgoy-5764细胞人体鼻病毒(rhinovirus)定性检测试剂盒M8015220次
Homo sapiens (Human)核纤层蛋白A/C(LMNA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)髓分化因子88(MyD88)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)法尼酯X受体(FXR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)骨骼肌快肌肌钙蛋白I(TNNI2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)趋化因子C-X-C-基元受体7(CXCR7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)磷脂酶A2受体1(PLA2R1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)封闭蛋白11(CLDN11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)前列腺六跨膜表皮抗原2(STEAP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)DNA甲基转移酶1(DNMT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)DNA酶Ⅰ样蛋白3(DNASE1L3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)死亡关联蛋白激酶1(DAPK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)原钙黏素β16(PCDHβ16)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)多聚ADP核糖聚合酶4(PARP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)钙离子转运ATP酶A2(ATP2A2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)中间α-球蛋白抑制因子H3(ITIH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式细菌 RNAout50 次包装Rattus norvegicus (Rat)成纤维细胞生长因子15(FGF15)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)叉头框蛋白O3(FOXO3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)软骨关联蛋白(CRTAP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)扭转原肠胚形成同源物1(TWSG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)端粒酶逆转录酶(TERT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)BMP结合内皮调节因子(BMPER)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)基质金属蛋白酶14(MMP14)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)BMP结合内皮调节因子(BMPER)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)钙磷蛋白(CAPS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)不良素(DYSF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)补体成分1q子成分样蛋白1(C1qL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式细菌 RNAout50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。