1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-5541粪便细菌DNA分离试剂盒M7992950次
shgoy-5542细菌冻存培养基M79930100毫升
shgoy-5543特殊细菌营养基M79931100毫升
shgoy-5544细菌营养琼脂平板M7993250个
shgoy-5545细菌营养肉汤M79933500毫升
shgoy-5546苯乙醇(PEA)革兰氏阳性细菌选择琼脂平板M7993450个
shgoy-5547伊红甲基蓝(EMB)革兰氏阴性细菌选择琼脂平板M7993550个
shgoy-5548细菌葡萄糖酵解酚红琼脂平板M7993650个
shgoy-5549细菌乳糖酵解酚红琼脂平板M7993750个
shgoy-5550细菌茁糖酵解酚红琼脂平板M7993850个
shgoy-5551细菌甘露醇酵解酚红琼脂平板M7993950个
shgoy-5552细菌葡萄糖酵解溴百里酚蓝(BTB)琼脂平板M7994050个
shgoy-5553细菌乳糖酵解溴百里酚蓝(BTB)琼脂平板M7994150个
shgoy-5554细菌茁糖酵解溴百里酚蓝(BTB)琼脂平板M7994250个
shgoy-5555细菌西蒙(SIMMON)柠檬酸琼脂平板M7994350个
shgoy-5556细菌淀粉琼脂平板M7994450个
shgoy-5557细菌丁酸甘油脂琼脂平板M7994550个
shgoy-5558细菌牛奶石蕾琼脂平板M7994650个
shgoy-5559细菌明胶琼脂平板M7994750个
shgoy-5560细菌尿素琼脂平板M7994850个
shgoy-5561细菌尿氨酸肉汤M79949500毫升
shgoy-5562细菌苯丙氨酸琼脂平板M7995050个
shgoy-5563细菌蛋白胨铁琼脂平板M7995150个
Homo sapiens (Human)血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPX3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)神经软骨蛋白(NCDN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)前蛋白转化酶枯草溶菌素5(PCSK5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)血清淀粉样P物质(SAP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)粒细胞趋化蛋白2(GCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)胃动蛋白2(GKN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)血管生成素样蛋白7(ANGPTL7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)γ-氨基丁酸A受体α2(γABRα2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)心肌肌钙蛋白T(TNNT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式病毒 RNAout50 次包装Homo sapiens (Human)绒毛膜促性腺激素α肽(CGα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D1(GPLD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)免疫球蛋白A1(IgA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)免疫球蛋白A2(IgA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)D-氨基酸氧化酶激活因子(DAOA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)无翅型MMTV整合位点家族成员5A(WNT5A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)Discs大同源物4(DLG4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)神经调节素4(NRG4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)神经调节素3(NRG3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)无翅型MMTV整合位点家族成员5A(WNT5A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)Ⅰ型胶原α1(COL1α1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)甘露糖受体C1(MRC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式病毒 RNAout50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。