1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-4067细胞对氧磷酶2(PON2)活性比色法定量检测试剂盒M78455
shgoy-4068组织对氧磷酶2(PON2)活性比色法定量检测试剂盒M78456
shgoy-4069细胞对氧磷酶3(PON3)活性比色法定量检测试剂盒M78457
shgoy-4070组织对氧磷酶3(PON3)活性比色法定量检测试剂盒M78458
shgoy-4071细胞对氧磷酶3(PON3)活性荧光定量检测试剂盒M78459
shgoy-4072组织对氧磷酶3(PON3)活性荧光定量检测试剂盒M78460
shgoy-4073动物细胞醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂盒M7846120次
shgoy-4074动物组织醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂盒M7846220次
shgoy-4075细菌醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂M7846320次
shgoy-4076真菌/酵母醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂盒M7846420次
shgoy-4077植物醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂盒M7846520次
shgoy-4078动物细胞醛酮还原酶1A(aldo-keto reductase 1A)活性比色法定量检测试剂盒M7846620次
shgoy-4079动物细胞醛酮还原酶1B(aldo-keto reductase 1B)活性比色法定量检测试剂盒M7846720次
shgoy-4080动物细胞醛酮还原酶1C(aldo-keto reductase 1C)活性比色法定量检测试剂盒M7846820次
shgoy-4081动物细胞醛酮还原酶1D(aldo-keto reductase 1D)活性比色法定量检测试剂盒M7846920次
shgoy-4082动物细胞醛酮还原酶1E(aldo-keto reductase 1E)活性比色法定量检测试剂盒M7847020次
shgoy-4083动物组织醛酮还原酶1A(aldo-keto reductase 1A)活性比色法定量检测试剂盒M7847120次
shgoy-4084动物组织醛酮还原酶1B(aldo-keto reductase 1B)活性比色法定量检测试剂盒M7847220次
shgoy-4085动物组织醛酮还原酶1C(aldo-keto reductase 1C)活性比色法定量检测试剂盒M7847320次
shgoy-4086动物组织醛酮还原酶1D(aldo-keto reductase 1D)活性比色法定量检测试剂盒M7847420次
shgoy-4087动物组织醛酮还原酶1E(aldo-keto reductase 1E)活性比色法定量检测试剂盒M7847520次
Rhesus monkey (Simian)半乳凝素3(GAL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)半乳凝素3(GAL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)转化生长因子β诱导蛋白(TGFβI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)转化生长因子β诱导蛋白(TGFβI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rhesus monkey (Simian)凝溶胶蛋白(GS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Ki-67蛋白(Ki67P)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Sus scrofa; Porcine (Pig)细胞间粘附分子1(ICAM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)胰岛素样生长因子1(IGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)头蛋白(NOG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)载脂蛋白C1(APOC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)嗅素4(OLFM4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)纤维介素蛋白(FGL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
动物 DNAout100mL包装General鲑鱼降钙素(SCT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)末端补体复合体C5b-9(C5b-9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲb(FcγR3B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)硬骨素(SOST)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)补体因子I(CFI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Sus scrofa; Porcine (Pig)β-乳球蛋白(βLg)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)心肌型兰尼定受体2(RYR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Equus caballus; Equine (Horse)血管内皮生长因子A(VEGFA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Bos taurus; Bovine (Cattle)谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)前动力蛋白受体1(PKR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)前动力蛋白受体1(PKR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)丙酮酸激酶(PK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
动物 DNAout100mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。