1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
)活性比色法定量检测试剂盒M7818620次
shgoy-3799组织半胱氨酸蛋白酶-6(CASPASE-6)活性比色法定量检测试剂盒M7818720次
shgoy-3800细胞半胱氨酸蛋白酶-6(CASPASE-6)活性荧光定量检测试剂盒M7818820次
shgoy-3801组织半胱氨酸蛋白酶-6(CASPASE-6)活性荧光定量检测试剂盒M7818920次
shgoy-3802细胞半胱氨酸蛋白酶-7(CASPASE-7)活性比色法定量检测试剂盒M7819020次
shgoy-3803组织半胱氨酸蛋白酶-7(CASPASE-7)活性比色法定量检测试剂盒M7819120次
shgoy-3804细胞半胱氨酸蛋白酶-7(CASPASE-7)活性荧光定量检测试剂盒M7819220次
shgoy-3805组织半胱氨酸蛋白酶-7(CASPASE-7)活性荧光定量检测试剂盒M7819320次
shgoy-3806细胞半胱氨酸蛋白酶-8(CASPASE-8)活性比色法定量检测试剂盒M7819420次
shgoy-3807组织半胱氨酸蛋白酶-8(CASPASE-8)活性比色法定量检测试剂盒M7819520次
shgoy-3808细胞半胱氨酸蛋白酶-8(CASPASE-8)活性荧光定量检测试剂盒M7819620次
shgoy-3809组织半胱氨酸蛋白酶-8(CASPASE-8)活性荧光定量检测试剂盒M7819720次
shgoy-3810细胞半胱氨酸蛋白酶-9(CASPASE-9)活性比色法定量检测试剂盒M7819820次
shgoy-3811组织半胱氨酸蛋白酶-9(CASPASE-9)活性比色法定量检测试剂盒M7819920次
shgoy-3812细胞半胱氨酸蛋白酶-9(CASPASE-9)活性荧光定量检测试剂盒M7820020次
shgoy-3813组织半胱氨酸蛋白酶-9(CASPASE-9)活性荧光定量检测试剂盒M7820120次
shgoy-3814细胞半胱氨酸蛋白酶-10(CASPASE-10)活性比色法定量检测试剂盒M7820220次
shgoy-3815组织半胱氨酸蛋白酶-10(CASPASE-10)活性比色法定量检测试剂盒M7820320次
shgoy-3816细胞半胱氨酸蛋白酶-10(CASPASE-10)活性荧光定量检测试剂盒M7820420次
shgoy-3817组织半胱氨酸蛋白酶-10(CASPASE-10)活性荧光定量检测试剂盒M7820520次
shgoy-3818细胞半胱氨酸蛋白酶-12(CASPASE-12)活性比色法定量检测试剂盒M7820620次
shgoy-3819组织半胱氨酸蛋白酶-12(CASPASE-12)活性比色法定量检测试剂盒M7820720次
shgoy-3820细胞半胱氨酸蛋白酶-12(CASPASE-12)活性荧光定量检测试剂盒M7820820次
(PDHβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)烟碱型胆碱受体α2(CHRNα2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)脱铁转铁蛋白(apoTf)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)延胡索酸酶(FUM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
磁珠血液 DNAout50 次包装Rattus norvegicus (Rat)成纤维细胞生长因子23(FGF23)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)激肽释放酶10(KLK10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)组织蛋白酶S(CTSS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)白介素32(IL32)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)亮氨酸丰富α2-糖蛋白1(LRG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)肌腱蛋白X(TNX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)肌腱蛋白X(TNX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)肌腱蛋白X(TNX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)谷胱甘肽过氧化酶1(GPX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)黑色素瘤抗原家族A1(MAGEA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)芳香胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
磁珠血液 DNAout50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。