1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
检测试剂盒-LEPTINM7711010/20次
shgoy-2723 载玻片细胞蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTINM7711110/20次
shgoy-2724 冰冻切片组织蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTINM7711210/20次
shgoy-2725 石蜡切片组织蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTINM7711310/20次
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shgoy-2731 FITC绿色荧光标记一抗M7711950微克
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shgoy-2744免疫细胞化学HRP酶联DAB间接检测
体2(EGFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)金属硫蛋白2(MT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)微管蛋白β(TUBβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)G组着色性干皮病偶联因子(XPG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)白介素15(IL15)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)CD19分子(CD19)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)癌胚抗原(CEA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)CD3d分子(CD3d)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式真菌 DNAout50 次包装Homo sapiens (Human)凝血因子Ⅶ(F7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)角蛋白13(KRT13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Sus scrofa; Porcine (Pig)白介素5(IL5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)高迁移率族核小体结合域蛋白1(HMGN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)叉头框蛋白P3(FOXP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)白介素1受体关联激酶2(IRAK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)白介素1受体关联激酶2(IRAK2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)小核糖核蛋白多肽D1(SNRPD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)神经丝蛋白3(NEF3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Apelin 36蛋白(AP36)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)载脂蛋白C3
柱式真菌 DNAout50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。