1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
M7693210次
shgoy-2545蛋白电泳固绿染色试剂盒M7693310次
shgoy-2546蛋白电泳丽春红染色试剂盒M7693410次
shgoy-2547铜蛋白电泳染色试剂盒M7693510次
shgoy-2548蛋白质西方杂交免疫印迹ECL化学发光检测试剂盒M769365次
shgoy-2549蛋白质西方杂交免疫印迹ECL化学发光检测试剂盒(含抗体)M769375次
shgoy-2550蛋白质西方杂交免疫印迹DAB显色检测试剂盒M769385次
shgoy-2551蛋白质西方杂交免疫印迹消除试剂盒M7693920次
shgoy-2552化学发光免疫印迹消除试剂盒M7694020次
shgoy-2553琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹ECL化学发光检测试剂盒M769415次
shgoy-2554琼脂糖凝胶法蛋白质西方杂交免疫印迹DAB显色检测试剂盒M769425次
shgoy-2555远西方杂交(FAR WESTERN BLOT) 印迹同位素检测试剂盒M769435次
shgoy-2556印迹覆膜结合(BLOT OVERLAY BINDING)同位素检测试剂盒M769445次
shgoy-2557远西方杂交(FAR WESTERN BLOT) 印迹消除试剂盒M7694520次
shgoy-2558蛋白质西方杂交10倍印迹膜转移缓冲液M76946500毫升
shgoy-2559蛋白质西方杂交10倍清理缓冲液M76947500毫升
shgoy-2560通用型ECL免疫印迹化学发光溶液M76948A液:50毫升B液:50毫升1000cm2
shgoy-2561高质型ECL免疫印迹化学发光溶液M76949A液:100毫升B液:500微升1000cm2
shgoy-2562持久型ECL免疫印迹化学发光溶液M76950A液:100毫升B液:500微升1000cm2
shgoy-2563超敏型ECL免疫印迹化学发光溶液M76951A液:100毫升B液:500微升1000cm2
shgoy-2564通用型DAB显色溶液M76952A液:10毫升B液:90毫升
shgoy-2565增强型DAB显色溶液M76953A液:10毫升B液:90毫升C液:1毫升
shgoy-2566蛋白免疫杂交封闭溶液M76954100毫升
shgoy-2567通用型ECL化学发光显影试剂盒M7695510次
shgoy-2568高质型ECL化学发光显影试剂盒M7695610次
Homo sapiens (Human)小乳腺表皮粘蛋白(SBEM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
General去氨精氨酸加压素(DDAVP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)半胱氨酰白三烯受体2(CYSLTR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶5(MAP4K5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)桩蛋白(Pax)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式动物线粒体 DNAout,PCR 级50 次包装Chicken (Gallus)转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Sus scrofa; Porcine (Pig)转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)巨噬细胞来源趋化因子(MDC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)胱天蛋白酶11(CASP11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP3α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
柱式动物线粒体 DNAout,PCR 级50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。