1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2340 细胞/组织裂解悬液、血液、体液等组蛋白ELISA定量试剂盒M7672824/48/96次
shgoy-2341海洋动物种系COI-5基因扩增分析试剂盒M7672920次
shgoy-2342海洋动物种系18sRNA基因扩增分析试剂盒M7673020次
shgoy-2343通用型RFLP基因分析试剂盒 M7673120次
shgoy-2344引物设计合成和酶切位点分析M767321个基因
shgoy-2345人体(apolipoprotein)RFLP基因分析试剂盒M7673320次
shgoy-2346人体EIF-2AK3 RFLP基因分析试剂盒M7673420次
shgoy-2347人体BRCA-2 RFLP基因分析试剂盒M7673520次
shgoy-2348人体FACTOR V RFLP基因分析试剂盒M7673620次
shgoy-2349人体HLA-A(EXON2)RFLP基因分析试剂盒M7673720次
shgoy-2350人体Caveolin-1 RFLP基因分析试剂盒M7673820次
shgoy-2351人体CYCLIN D1 RFLP基因分析试剂盒M7673920次
shgoy-2352人体CYP1A2 RFLP基因分析试剂盒M7674020次
shgoy-2353人体Methyl tetrahydrofolate reductase RFLP基因分析试剂盒M7674120次
shgoy-2354人体Hemoglobin E RFLP基因分析试剂盒M7674220次
shgoy-2355人体HLA-DPB1 RFLP基因分析试剂盒M7674320次
shgoy-2356人体Interleukin-4-receptor alpha RFLP基因分析试剂盒M7674420次
shgoy-2357人体c-Ki-ras RFLP基因分析试剂盒M7674520次
shgoy-2358人体MMP3 RFLP基因分析试剂盒M7674620次
shgoy-2359人体MMP9 RFLP基因分析试剂盒M7674720次
α1(PRKAα1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)叉头框蛋白P1(FOXP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)叉头框蛋白O1(FOXO1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)叉头框蛋白C1(FOXC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)叉头框蛋白O3(FOXO3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)CD14分子(CD14)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)棕榈酰化膜蛋白2(MPP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)乙醇脱氢酶1(ADH1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)颗粒酶K(GZMK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)血管生成素4(ANGPT4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)整合素αD(ITGαD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
百万碱基级细菌 (G-)DNAout10 次包装Rattus norvegicus (Rat)脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)血管生成素4(ANGPT4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)血管生成素4(ANGPT4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Sus scrofa; Porcine (Pig)心肌肌钙蛋白I(TNNI3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Canis familiaris; Canine (Dog)CD6分子(CD6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)心钠肽(ANP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)粘蛋白5B(MUC5B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Oryctolagus cuniculus (Rabbit)催乳素(PRL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)蛋白酪氨酸磷酸酶受体N(PTPRN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)亲环素B(CYPB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)抑制素结合蛋白
百万碱基级细菌 (G-)DNAout10 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。