1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1116载玻片细胞PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7550410/20次
shgoy-1117冰冻切片组织PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7550510/20次
shgoy-1118石蜡切片组织PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7550610/20次
shgoy-1119 载玻片细胞PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7550710/20次
shgoy-1120 冰冻切片组织PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7550810/20次
shgoy-1121 石蜡切片组织PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7550910/20次
shgoy-1122 细胞PAR-2蛋白表达比色法定量检测试剂盒M7551010/50 次
shgoy-1123 细胞PAR-2蛋白表达荧光定量检测试剂盒M7551110/50 次
shgoy-1124 PAR-2蛋白表达西方杂交分析试剂盒M755125次
shgoy-1125PAR-2蛋白免疫共沉淀分析试剂盒M755135次
shgoy-1126PAR-2蛋白表达ELISA定量检测试剂盒M7551425次
shgoy-1127 细胞PAR-3蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒M7551510/20次
shgoy-1128载玻片细胞PAR-3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7551610/20次
shgoy-1129冰冻切片组织PAR-3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7551710/20次
shgoy-1130石蜡切片组织PAR-3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7551810/20次
shgoy-1131 载玻片细胞PAR-3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7551910/20次
shgoy-1132 冰冻切片组织PAR-3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7552010/20次
shgoy-1133 石蜡切片组织PAR-3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7552110/20次
shgoy-1134 细胞PAR-3蛋白表达比色法定量检测试剂盒M7552210/50 次
shgoy-1135 细胞PAR-3蛋白表达荧光定量检测试剂盒M7552310/50 次
shgoy-1136 PAR-3蛋白表达西方杂交分析试剂盒M755245次
Rattus norvegicus (Rat)半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(CST3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(CST3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)C组着色性干皮病偶联因子(XPC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
动态浊度法内毒素定量试剂盒1.7mL×10 支包装Mus musculus (Mouse)C组着色性干皮病偶联因子(XPC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)骨桥素(OPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)骨桥素(OPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Oryctolagus cuniculus (Rabbit)骨桥素(OPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)骨桥素(OPN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)α-骨胶原交联(αCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)α-骨胶原交联(αCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)α-骨胶原交联(αCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
General脱氧吡啶酚(DPD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Ⅲ型胶原交联羧基端肽(CTXⅢ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)Ⅲ型胶原交联羧基端肽(CTXⅢ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)Ⅲ型胶原交联羧基端肽(CTXⅢ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)β-骨胶原交联(βCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)β-骨胶原交联(βCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)β-骨胶原交联(βCTx)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)血红素氧合酶2(HO2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)血红素氧合酶2(HO2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)血红素氧合酶2(HO2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Rattus norvegicus (Rat)分泌型免疫球蛋白A(sIgA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Mus musculus (Mouse)分泌型免疫球蛋白A(sIgA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
动态浊度法内毒素定量试剂盒1.7mL×10 支包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。