1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-756植物ATP生物发光法定量检测试剂盒M7514450次
shgoy-757食物污染ATP生物发光法定量检测试剂盒M7514550次
shgoy-758饮料污染ATP生物发光法定量检测试剂盒M7514650次
shgoy-759水质污染ATP生物发光法定量检测试剂盒M7514750次
shgoy-760动物细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂检测试剂盒M7514810次
shgoy-761盘基网柄菌(Dicyostelium)细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂检测试剂盒M7514910次
shgoy-762细菌细胞趋化作用(chemotaxis)软琼脂检测试剂盒M7515010次
shgoy-763通用型细胞粘附性(cell adhesion)比色法检测试剂盒M7515150次
shgoy-764通用型细胞粘附性(cell adhesion)荧光检测试剂盒M7515250次
shgoy-765通用型血液凝集分子纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒M7515350次
shgoy-766肝素(heperin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒M7515450次
shgoy-767肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒M7515520次
shgoy-768肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒M7515620次
shgoy-769水蛭素(hirudin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒M7515750次
shgoy-770水蛭素(hirudin)活性比色法定量检测试剂盒M7515820次
shgoy-771水蛭素(hirudin)活性荧光定量检测试剂盒M7515920次
shgoy-772凝血酶时间(TT)检测试剂盒M7516020次
shgoy-773凝血酶原时间(PT)检测试剂盒M7516120次
shgoy-774优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒M7516220次
shgoy-775活化部分凝血活酶时间(APTT)凝固法检测试剂盒M7516320次
shgoy-776活化部分凝血活酶时间(APTT)比色法检测试剂盒M7516420次
shgoy-777纤维蛋白原凝结时间(FIB)Clauss法检测试剂盒M7516520次
(-)-Epicatechin gallate表儿茶素没食子酸酯
(-)-epigallocatechin表没食子儿茶素
L-Epicatechin表儿茶素
Theophylline茶碱
(-)-Gallocatechin gallate没食子儿茶素没食子酸酯
NUCIFERINE荷叶碱
Liensinine莲心碱
Isoliensinine异莲心碱
ginkgolide A银杏内酯A
Bilobalide白果内酯
Neferine甲基莲心碱
Schisantherin A五味子酯甲
WUWEIZISU C五味子丙素
2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl [2S-(2α,3E,4β)]-3-ethylidene-2-(β-D-glucopyranosyloxy)-3,4-dihydro-5-(methoxycarbonyl)-2H-pyran-4-acetate橄榄苦苷
Peiminine贝母素乙
3,4-Dihydroxyphenylethanol羟基酪醇
Rhynchophylline钩藤碱
氨基磁珠2mL包装Monocrotaline野百合碱
isorhynchophylline异钩藤碱
Harpagosid哈巴俄苷
Emodin大黄素
Rhein大黄酸
Chrysophanic acid大黄酚
aloe-emodine芦荟大黄素
Physcione大黄素甲醚
5,9:7,10a-Dimethano-10aH-[1,3]dioxocino[6,5-d]pyrimidine-4,7,10,11,12-pentol,2-amino-1,4,4a,5,9,10-hexahydro-12-(hydroxymethyl)-,(4R,4aR,5R,7S,9S,10S,10aR,11S,12S)-河豚毒素
Vinorelbine Ditartrate酒石酸长春瑞滨
Vinblastine sulfate硫酸长春碱
氨基磁珠2mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。