1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-582真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级绿色荧光测定试剂盒M7497050次
shgoy-583植物细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒M7497120次
shgoy-584植物细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒M7497250次
shgoy-585体液氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒M7497350次
shgoy-586体液氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒M7497450次
shgoy-587活体细胞氧化应激活性氧(ROS)原位染色试剂盒(超氧阴离子)M74975100次
shgoy-588冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)原位染色试剂盒(超氧阴离子)M7497650次
shgoy-589活体细胞氧化应激活性氧(ROS)原位比色法定量检测试剂盒(超氧阴离子)M74977100次
shgoy-590细胞培养液氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(超氧阴离子)M74978100次
shgoy-591植物氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(超氧阴离子)M7497920次
shgoy-592活体细胞氧化应激活性氧(ROS)原位荧光染色试剂盒(羟自由基)M7498020次
shgoy-593冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)原位荧光染色试剂盒(羟自由基)M7498120次
shgoy-594细胞氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)M7498220次
shgoy-595组织氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)M7498320次
shgoy-596体液氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)M7498420次
shgoy-597酵母氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)M7498520次
shgoy-598植物氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒(羟自由基)M7498620次
shgoy-599细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒(超氧阴离子)M7498720次
shgoy-600冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒(超氧阴离子)M7498850次
shgoy-601细胞培养液氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒(超氧阴离子)M7498920次
shgoy-602真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒(超氧阴离子)M7499020次
shgoy-603植物氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒(超氧阴离子)M7499120次
Betaine甜菜碱
Gastrodin天麻素
4-(1-Hydroxy-2-(methylamino)propyl)phenol hydrochloride甲基辛弗林盐酸盐
3-(4-HYDROXYPHENYL)ACRYLIC ACID对香豆酸
XyloseD-(+)-木糖
D(-)-Quinic acidD-(-)-奎宁酸
Aucubin桃叶珊瑚苷;杜仲苷
Phloretin根皮素
Swertiamarin獐牙菜苦苷
Raddeanoside R8多被银莲花皂苷R8
Oleanolic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranosideOleanolic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside(CAS:60213-69-6)
arctigenin牛蒡苷元;牛蒡子苷元
arctiin牛蒡子苷
Betulin白桦脂醇;桦木醇
Betulinicaldehyde白桦脂醛
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次包装2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin荭草素-2"-0-B-L半乳糖苷
Orientin荭草苷
Cucurbitacin B葫芦素B
Cucurbitacin E葫芦素E
Eupalinolide A野马追内酯A
Liquidambaric lactone路路通内酯
Eupalinolide B野马追内酯B
Betulonic acid路路通酸
9H-Xanthen-9-one,1,3,6-trihydroxy-8-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-7-methoxy-2-(3-methyl-2-buten-1-yl)-Garci D
9H-Xanthen-9-one,1,3,6,7-tetrahydroxy-8-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-2-(3-methyl-2-buten-1-yl)-Garci C
3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇
Broussonetine A构树碱A
Huzhangoside D虎掌草皂甙D
Olean-12-en-28-oicacid, 3-[[2-O-(6-deoxy-a-L-mannopyranosyl)-a-L-arabinopyranosyl]oxy]-23-hydroxy-, (3b,4a)-Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。