1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-025细胞培养污染性支原体M.hyorhinis鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒M7441320次
shgoy-026细胞培养污染性支原体M.orale鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒M7441420次
shgoy-027细胞培养污染性支原体M.hominis鉴定16S rDNAPCR扩增检测试剂盒M7441520次
shgoy-028细胞培养污染性支原体M.arginini鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒M7441620次
shgoy-029细胞培养污染性支原体A.laidlawii鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒M7441720次
shgoy-030细胞培养抗支原体污染试剂盒M7441810次
shgoy-031细胞脂质生成比色法定量检测试剂盒M74419
shgoy-032地塞米松细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒M7442020次
shgoy-033异丁甲基黄嘌呤细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒M7442120次
shgoy-034胰岛素细胞脂肪诱导生成比色法定量检测试剂盒M7442220次
shgoy-035细胞脂质溶解比色法定量检测试剂盒M74423
shgoy-036二甲苯细胞脂质溶解定性染色检测试剂盒M74424
shgoy-037细胞脂质比色法定量检测试剂盒M7442520/100次
shgoy-038组织脂质比色法定量检测试剂盒M7442620次
shgoy-039植物脂质比色法定量检测试剂盒M7442720次
shgoy-040脂肪肝比色法定量检测试剂盒M74428
shgoy-041DMEM培养基M744291/10升(片剂)
shgoy-042RPMI1640培养基M744301/10升(片剂)
shgoy-043MEM培养基M744311/10升(片剂)
shgoy-044M199培养基M744321/10升(片剂)
shgoy-045GMEM培养基M744331/10升(片剂)
shgoy-046DMEM/F12培养基M744341/10升(片剂)
shgoy-047McCOY’S 5A培养基M744351/10升(片剂)
shgoy-048LEIBOVITZ’S L15培养基M744361/10升(片剂)
shgoy-049ISCOVE’S MDM培养基M744371/10升(片剂)
shgoy-050GRACE’S 昆虫培养基M744381/10升(片剂)
C-fos即刻早期基因(一种原癌基因)抗原
CD3 epsilonCD3 epsilon(抗原)
chloramphenicol/BSA氯霉素偶联牛血清白蛋白
chloramphenicol/OVA氯霉素偶联鸡卵白蛋白蛋白
CXCL11干扰素诱导T细胞趋化因子抗原
Cathepsin G/CTSG组织蛋白酶G
CD68CD68(多肽抗原)
ChAT(Choline Acetyltransferase)胆碱乙酰转移酶(抗原)
CD36L1/SRB1高密度脂蛋白受体/清道夫受体抗原
Cox A16 polymerase3D柯萨奇病毒A16型聚蛋白3D
CRIPTO畸胎瘤衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)C端
CD33CD33抗原(人)
Calsequestrin肌钙集蛋白/收钙素
Cytokeratin 19细胞角蛋白19抗原
Diethylstilbestrol/BSA己烯雌酚偶联牛血清白蛋白
DHT/KLH protein双氢睾酮偶联血蓝蛋白
Diethylstilbestrol/KLH己烯雌酚偶联血蓝蛋白
DNA 非变性 PAGE 上样液10mL包装DHT/BSA双氢睾酮偶联牛血清白蛋白
2,4-D/KLH2,4-二氯苯氧乙酸偶联血蓝蛋白
rDen(rh-Dengue Virus)多价重组人登革热病毒诊断抗原
DCP peptide异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗原
EV71(Human enterovirus 71)VP4肠道病毒71型/手足口病病毒抗原
EGF protein (Active)重组人表皮生长因子
EGF(Epidermal growth factor)rat表皮生长因子多肽
EpCAM上皮细胞粘附分子/表皮细胞粘附分子
EpCAM上皮细胞粘附分子/表皮细胞粘附分子抗原
Estradiol/BSA雌二醇偶联牛血清白蛋白
ENO3骨骼肌烯醇化酶多肽
ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3)表皮生长因子受体3(抗原)
ER-Alpha雌激素受体
Estrogen receptor beta雌激素受体(多肽抗原)
ER-Alpha/Beta雌激素受体
DNA 非变性 PAGE 上样液10mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。