1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-28502-莰醇BorneolAR,98%M8450910克
shgoy-2851枞酸Abietic acidBR,97%M84510500克
shgoy-28522,4,6-三氯-1,3,5-三嗪Cyanuric chlorideAR,98%M845115克
shgoy-28532-乙烯基吡啶2-VP4NM8451225克
shgoy-28541,1,2-三氟-1,2,2-三氯乙烷1,1,2-TrichlorotrifluoroethaneCP,99.5%M845131公斤
shgoy-28554-羟基-3-甲氧基肉桂酸乙酯Ethyl ferulateAR,99.5%M8451425克
shgoy-2856豆油Soybean oilAR,99%M84515500克
shgoy-28571,5-五甲基烯四唑PentetrazolAR,80%M8451625克
shgoy-2858棓原Ellagic acidAR,70%M84517500克
shgoy-2859聚乙烯醇缩甲醛PVFAR,99%M845185克
shgoy-28602,6,8-三羟基嘌呤Uric acidCP,98%M84519500克
shgoy-2861嵌二萘PyreneLR,98%M8452010克
shgoy-28623-甲基环戊烷-1,2-二酮3-Methyl-1,2-cyclopentanedioneAR,98%M84521100克
shgoy-2863丙基硫氧嘧啶Propylthiouracil2N,200目M845221公斤
shgoy-28645,6,7,8,4'-五甲氧基黄酮Tangeretin3N,200目M84523250克
shgoy-2865醛甾酮Aldosterone4NM84524100克
shgoy-28661,1,1-三甲氧基乙烷Trimethyl orthoacetate4NM84525100克
shgoy-2867人参皂甙Rb1Ginsenoside Rb1CP,98.5%M8452625克
shgoy-2868人参皂甙Rb2Ginsenoside Rb2AR,99.5%M84527100克
shgoy-2869人参皂甙Rb3Ginsenoside Rb3BRM8452825克
shgoy-2870人参皂甙Rg1Ginsenoside Rg1BRM84529500克
shgoy-2871人参皂甙Rg2Ginsenoside Rg2BRM8453025克
shgoy-2872人参皂甙Rg3Ginsenoside Rg3BRM8453125克
shgoy-2873人参皂甙ReGinsenoside ReBRM845325克
shgoy-2874人参皂甙RcGinsenoside Rc色固M84533500克
shgoy-2875人参皂甙RdGinsenoside Rd色固M845341克
shgoy-2876人参皂甙RfGinsenoside Rf色固M845355克
phospho-Smad2(p-Ser465)petide磷酸化Smad2抗原
Smad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4)Smad4抗原
Smad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7)Smad 7(多肽)
phosphor-SMAD(p-Ser425)、phosphor-Mothers against decapentaplegic磷酸化SMAD(p-Ser425)抗原
SNAP-25 (synaptosomal-associated protein 25)突触相关膜蛋白25抗原
SnailSnail蛋白抗原
Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3)细胞因子信号传导抑制蛋白3抗原
SOD1(superoxide-dimutase-1)超氧化物歧化酶1抗原
SOD2 (superoxide-dimutase-2)超氧化物歧化酶2抗原
Somatostatin/GRIH生长抑素抗原
Sox2胚胎干细胞关键蛋白
TSFP1/SP1(transcription factor Sp1)SP1转录生长因子抗原
SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine)富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗原
SRF(Serum response factor)血清应答因子抗原
SREBP-1(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1)固醇调节元件结合蛋白1抗原
AKAP12A/SSeCKS peptide丝氨酸抑制蛋白激酶C底物抗原
Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1)阶段特异性胚胎表面抗原-1抗原
DNA 电泳分子量标准 (200-5000 bp)50 次包装SSTR1 (somatostatin receptor 1)生长抑素受体1(SSTR1)抗原
SSTR2 (somatostatin receptor 2)生长抑素受体2抗原
SSTR3 peptide生长抑素受体3抗原
SSTR5 (somatostatin receptor 5)生长抑素受体5抗原
STAT1(signal transducers and activators of transcription 1)信号转导与转录激活因子1抗原
phospho-STAT1(p-Tyr701) peptide磷酸化信号转导与转录激活因子1抗原
STAT3(signal transducers and activators of transduction3)信号转导和转录激活因子3抗原
STAT5(signal transducers and activators of transduction5)信号转导和转录激活因子5(STAT5)抗原
STAT6(signal transducers and activators of transduction 6)信号转导和转录激活因子6抗原
SULT1E1(Estrogen Sulfotranferase)雌激素硫酸转移酶抗原
DNA 电泳分子量标准 (200-5000 bp)50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。