1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2650三氧化二钐Samarium oxideBR,98%M8430910克
shgoy-2651钪氧Scandium oxideBR,98%M84310100克
shgoy-2652铥氧Thulium oxideBR,98%M84311500克
shgoy-2653钇氧Yttrium oxideBR,97%M8431210克
shgoy-2654蜜蜡Bees wax,whiteBR,98%M8431325克
shgoy-2655微晶蜡CeresinBR,85%M84314100克
shgoy-2656石蜡Paraffin with ceresinAR,99%M8431550毫升
shgoy-2657香柠檬油Bergamot OilAR,99%M8431610毫克
shgoy-2658蓖麻油Castor oilBR,99.9%M8431710克
shgoy-2659桂油Cinnamon oilCPM8431825克
shgoy-2660丁子香油Clove oilBR,97%M84319100克
shgoy-2661柏木油Cedarwood oilCPM8432025克
shgoy-2662洋橄榄油Olive oilBR,97%M843215克
shgoy-2663但马树脂Gum dammarAR,98%M8432225克
shgoy-2664乳香Gum masticCPM8432310克
shgoy-2665山达脂Gum sandaracCP,98%M8432410克
shgoy-2666紫胶ShellacCPM8432525克
shgoy-2667硬树脂Gum copalBR,99%M843265克
shgoy-2668中性树胶Neutral balsamBR,99.5%M8432725克
shgoy-2669二辛基磺化丁二酸钠Aerosol OTBR,99%M84328500毫升
shgoy-2670冷结树酯PhytagelAR,98%M84329100次/包
shgoy-2671西黄蓍胶粉Gum tragacanth powderGR,99.5%M843305克
shgoy-2672铬皮粉chromed hide powderAR,98%M8433125克
shgoy-2673二苯并吡嗪PhenazineAR,98.5%M84332100克
shgoy-2674硫氮杂蒽PZAR,95%M843335克
shgoy-2675全反-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-廿四碳六烯SqualeneCP,98.5%M8433425克
ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3)ENPP3抗原
IQGAP1支架蛋白抗原
IRF-1(Interferon regulatory factor-1)干扰素调节因子抗原
IRAK 2白介素-1受体相关激酶2
IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptide白介素-1受体拮抗剂抗原
Integrin a7(integrin alpha 7)整合素α7抗原
integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)粘附分子整合素β1抗原
Integrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e)粘附分子整合素α5抗原
Integrin alpha V/CD51 peptide整合素αV抗原
JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)蛋白质酪氨酸激酶JAK-1抗原
JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2)蛋白质酪氨酸激酶JAK-2抗原
phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗原
JNK1/3 (c-Jun amino-terminal kinase 1/3)c-Jun氨基末端激酶1/3多肽抗原
phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide磷酸化氨基末端激酶1/2/3(pJNK1/2/3)抗原
Ki-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67)Ki-67 Antigen
Klf4 (Kruppel likefactor 4)肠道内富含的Kruppel样因子抗原
phospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272)磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗原
phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5, Human, mo, rat, horse, bovine, rabbit, pig, dog磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗原
LDH(Lactate Dehydrogenase)乳酸脱氢酶抗原
Leptin receptor瘦素受体
PAFAH2/Lp-PLA2/PLA2G7(platelet-activating factor acetylhydrolase 2)脂蛋白磷脂酶A2抗原
Lgr5/GPR49肠上皮干细胞蛋白(多肽)
LH(Luteinizing Hormone)促黄体生成素抗原
LH(Luteinizing Hormone)人促黄体生成素(多肽)
LSouthern 专用 DNA Marker(DIG)20 次包装H/CG Receptor(Luteinizing Hormone/Choriogonadotropin Receptor)人促黄体生成素受体抗原
L-HDC (L-Histidine decarboxylase)L-组氨酸脱羧酶抗原
LIF peptide白血病抑制因子抗原
LIFR/CD118 peptide白血病抑制因子受体抗原
Lingo-1Nogo受体作用蛋白抗原
LIS1(Lissencephaly-1 protein)无脑回的致病基因LIS1抗原
LFABP/FABP-1(Liver Fatty acid binding protein)肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原
LFABP/FABP-2(Liver Fatty acid binding protein)肝脏型脂肪酸结合蛋白抗原
LN (laminin)层粘连蛋白(多肽抗原)
Southern 专用 DNA Marker(DIG)20 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。