1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2550白色氧化锡Tin(IV) oxideAR,99%M842095克
shgoy-2551乙二酸亚锡Tin(II) oxalateCP,99%M8421025克
shgoy-2552钨TungstenAR,99.7%M8421125克
shgoy-2553一碳化钨Tungsten carbide5NM8421225克
shgoy-2554氧化钨Tungsten(VI)oxide4N,0.2㎜M84213500克
shgoy-2555三氟化铈Cerium(III) fluorideCP,40%M8421425克
shgoy-2556二氧化铈Cerium(IV) oxideARM84215100克
shgoy-2557二乙酸铝Aluminum acetate basicARM84216100毫升
shgoy-2558硬酯酸铝Aluminum tristearateBR,99%M8421725克
shgoy-2559异丙基氧化铝Aluminum isopropoxideBR,89%M84218500克
shgoy-2560铬ChromiumBR,99%M8421910克
shgoy-2561金属铬ChromiumARM84220100克
shgoy-2562铬片ChromiumAR,99%M842215克
shgoy-2563氧化铬Chromium(III) oxideBR,99%M8422225克
shgoy-2564醋酸铬Chromium(III) acetateBR,99%M8422325克
shgoy-2565溴化铯Cesium bromideBR,95%M84224500克
shgoy-2566碳酸铯Cesium carbonateBR,97%M8422525克
shgoy-2567铬酸铯Cesium chromateBR,97%M8422625克
shgoy-2568碘化铯Cesium iodideBR,97%M84227250克
shgoy-2569金属镓GalliumCP,98%M8422825毫升
shgoy-2570三氧化二镓Gallium(III)oxideBR,99%M842291克
shgoy-2571钯PalladiumBR,99%M842305克
shgoy-2572白金PlatinumAR,99%M842311克
shgoy-2573铂金丝PlatinumCPM8423210克
shgoy-2574(SP-4-1)-碘化铂Platinum tetraiodideAR,99%M84233250毫克
shgoy-2575无水氧化铂Platinum(IV) oxideBR,99%M842341克
shgoy-2576镉片CadmiumBR,98.5%M842355克
GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide胰高血糖素样肽-1(多肽)
GLP-1 peptide胰高血糖素样肽-1(多肽)
GLUT3(Glucose transporter 3)葡萄糖转运蛋白3抗原
GM-CSF(Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factors)粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子抗原
GPA33(glycoprotein A33 transmembrane)糖蛋白A33(跨膜)抗原
glypican 1磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗原
GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7)磷脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽)
Glypican 4(Glypican proteoglycan 4)磷脂酰基醇蛋白聚糖-4抗原
GRB2/ASH peptide生长因子受体结合蛋白2抗原
GZMB/CCPI(Granzyme B)颗粒酶B抗原
UTS2R/GPR14(Urotensin II receptor:G Protein Coupled Receptor 14)G蛋白偶联受体14抗原
GPR30(G Protein Coupled Receptor 30)G蛋白偶联受体30抗原
GnRHR peptide促性腺激素释放激素受体抗原
KiSS-1R/GPR54/GPCR54(KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54)G蛋白偶联受体54抗原
Southern Marker Oligo(DIG)20 次包装GRK2/BARK1 (G-protein coupled receptor kinase 2)G蛋白偶合受体激酶2抗原
GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)促代谢型谷氨酸受体2抗原
GRO Alpha/GRO/MGSA/CXCL1 protein (growthregulated oncogene Alpha)生长调节致癌基因α/黑素瘤生长刺激因子α 抗原
GRP78(glucose regulated protein 78)葡萄糖调节蛋白78抗原(热休克蛋白70蛋白5)
GSR/GRase(glutathione reductase)谷胱甘肽还原酶抗原
A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human)A型人流感病毒H1N1-M2蛋白多肽
A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine)A型猪流感病毒H1N1-M2蛋白
H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)流感病毒A抗原
H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)流感病毒A抗原
H2AX peptide组蛋白H2AX多肽抗原
H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)流感病毒A抗原
H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)流感病毒A抗原
Haase(hyaluronidase)透明质酸酶/玻璃酸酶抗原
HA tagHA tag标签多肽
HA tag(map)HA tag标签(分支多肽)
Southern Marker Oligo(DIG)20 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。