1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2347盐酸苄脒Benzamidine hydrochlorideCPM84006100克
shgoy-2348碘酸钾Potassium iodateCPM84007500克
shgoy-2349一盐基磷酸钾Potassium phosphate monobasicAR,99%M840081克
shgoy-2350二盐基磷酸钾DKPCPM840095克
shgoy-2351无水磷酸二钾Potassium phosphate dibasicCP,98%M8401010克
shgoy-2352吐酒石Potassium antimonyl tartrate特纯,98%M8401125克
shgoy-2353苯二甲酸氢钾Potassium hydrogen phthalateCP,97%M84012100克
shgoy-2354钾溴Potassium bromideBR,97%M8401310克
shgoy-2355碳酸钾Potassium carbonateARM84014100毫克
shgoy-2356碳酸钾一点五水合物Potassium carbonate sesquihydrateCPM840151克
shgoy-2357铬酸二钾Potassium chromateCPM840165克
shgoy-2358红矾钾Potassium dichromateAR,99.5%M8401725克
shgoy-2359苛性钾Potassium hydroxideCP,98%M84018100克
shgoy-2360灰碘Potassium iodideCP,98%M8401910克
shgoy-2361酒石酸二钾半水合物Potassium tartrate hemihydrateCP,98%M8402050克
shgoy-2362碘化铋合四碘化钾Bismuth potassium iodideAR,95%M840215克
shgoy-2363重碳酸钾K-LyteBRM8402225克
shgoy-2364氟化铝钾Potassium fluoaluminateBR,97%M84023100克
shgoy-2365硼氟化钾Potassium fluoborateAR,98%M8402410克
shgoy-2366氟化钛钾Potassium titanium fluorideAR,97%M8402525克
shgoy-2367三水磷酸钾Tripotassium phosphate trihydrateAR,97%M84026100克
shgoy-2368锑(V)酸钾Potassium pyroantimonateAR,98%M84027500克
shgoy-2369偏硅酸钾Potassium silicateGR,99%M840281克
shgoy-2370硼酸钾 Potassium tetraborate tetrahydrateGR,99%M840295克
shgoy-2371钨酸钾Potassium tungstateAR,95%M84030500克
CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted)活化T细胞表达和分泌的调节因子抗原
CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta)巨噬细胞炎性蛋白1β抗原
MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha)巨噬细胞炎性蛋白3α抗原
CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12)单核细胞趋化蛋白5抗原
CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14)嗜酸粒细胞趋化蛋白14抗原
ABCD-1/CCL22嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗原
MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta)巨噬细胞炎性蛋白19抗原
CCL26(Eotaxin 3)嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗原
CCR-1(CC chemokine receptor 1)细胞表面趋化因子受体1抗原
CCR-3(CC chemokine receptor 3)CC趋化因子受体3抗原
CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)细胞表面趋化因子受体2A抗原
CCR-4(C-C chemokine receptor 4)细胞表面趋化因子受体4抗原
CCR-6/CD196 peptide细胞表面趋化因子受体6抗原
微量 DNA 助沉剂0.1mL包装CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide细胞表面趋化因子受体6抗原
CCR-7(CC chemokine receptor 7)CC趋化因子受体7(多肽)
CXCL10/IP-10CXCL10趋化因子10/干扰素诱导蛋白10抗原
VEGF(Vascular endothelial growth factor)血管内皮生长因子(多肽抗原)
CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)CD10抗原
ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)ZCWCC1抗原
CD138/Syndecan-1多配体蛋白聚糖1抗原
CD146/MCAM黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗原
ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)氨肽酶N抗原
CD14(cluster of differentiation antigen 14)CD14/内毒素受体抗原
CD28CD28抗原
CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)活化白细胞粘附分子抗原
微量 DNA 助沉剂0.1mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。