1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1660吗啉乙磺酸钠盐MES sodium saltBRM83319500克
shgoy-16614-丙磺酸基吗啉MOPSINDM83320250毫克
shgoy-16623-(N-吗啉)丙磺酸钠MOPS sodium saltBR,99%M833215克
shgoy-16633-吗啉-2-羟基丙磺酸MOPSO高纯,99%M8332225克
shgoy-16643-吗啉-2-羟基丙磺酸钠MOPSO sodium salt质谱级M83323100克
shgoy-1665Tris乙磺酸TESBR,97%,有害品M83324500克
shgoy-16662-[(三(羟甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸钠TES sodium saltAR,90%M833251公斤
shgoy-1667三羟甲基甲胺基丙磺酸TAPSAR,95%M833265克
shgoy-16683-[N-[三(羟甲基)甲基]氨基]丙磺酸钠TAPS sodium saltAR,98%M8332725克
shgoy-16693-[ (N-三(羟甲基)甲氨基]-2-羟基丙磺酸TAPSOIND,50%M83328100克
shgoy-16703-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸钠TAPSO sodium saltARM833295克
shgoy-1671DIPSO单钠盐DIPSO sodium salt高纯,98%M8333025克
shgoy-1672成套缓冲剂成套缓冲剂CPM83331100克
shgoy-1673PBS磷酸盐缓冲液PBS(Phosphate buffer saline) powderedAR,99%M8333225克
shgoy-1674缓冲液Buffer solution高纯,98%M83333100克
shgoy-1675磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer solution高纯,98%M833345克
shgoy-1676碳酸盐缓冲液Carbonate Buffer solution蛋白生物学M8333525克
shgoy-1677TRIS-HC1缓冲液TRIS-HC1 Buffer solutionIND,80%M83336100克
shgoy-1678醋酸钠醋酸缓冲液Sodium acetate -Acetic acid Buffer solutionBRM83337500克
shgoy-1679巴比妥钠盐酸缓冲液Barbitone sodium-Hydrochloric acid Buffer solutionARM833381公斤
shgoy-1680硼砂盐酸缓冲液Borax-Hydrochloric acid Buffer solutionARM8333925克
shgoy-1681盐酸缓冲液Potassium chloride-Hydrochloric acid Buffer solutionBR,98%M83340100克
shgoy-1682柠檬酸钠盐酸缓冲液Sodium citrate-Hydrochloric acid Buffer solutionBR,98%M8334125克
shgoy-1683饱和苦味酸缓冲液Saturated picric acid Buffer solutionINDM83342500克
SEZ6L癫痫样相关蛋白6抗体
SHPRH组蛋白连接作用蛋白抗体
SIRT3线粒体乙酰化酶3抗体
SLC5A8钠碘转运体蛋白8抗体
SASH1肿瘤抑制基因PEPE1抗体
SESN3Sestrin3抗体
SMYD4组蛋白甲基转移酶SMYD4抗体
mSin3A同源转录调节蛋白Sin3A抗体
STAT5b信号转导和转录激活因子5b抗体
phospho-STAT5b(Ser731) 磷酸化信号转导和转录激活因子5b抗体
SH2D2A血管内皮生长因子受体相关蛋白抗体
SLC9A9钠氢通道蛋白9家族A9抗体
SENP3类泛素蛋白3抗体
SLIT2/Slil3神经迁移蛋白Slit2/3抗体
Smoothened跨膜蛋白Smoothened抗体
Stanniocalcin 1斯钙素抗体
SIPA1信号诱导增殖相关蛋白1抗体
STK40丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶40抗体
SCG10神经生长相关蛋白SCG10抗体
15mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)1个包装S100A4S100A4抗体
STARD5促黄体激素诱导蛋白5抗体
Sca1T淋巴细胞激活蛋白抗体
Phospho-RPS6 (Ser235+Ser236)磷酸化S6核糖体蛋白抗体
Phospho-MEK4 (Ser257)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体
Phospho-MEK4 (Thr261)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体
Phospho-MEK4 (Ser257 + Thr261)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体
SGK1糖皮质激素调节激酶1抗体
Phospho-PLC beta3 (Ser537)磷酸化磷酯酶Cβ3抗体
Phospho-SMC1(Ser957)磷酸化染色体结构维持蛋白质1抗体
SLC6A19钾依赖钠钙交换蛋白6抗体
15mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)1个包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。