1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-13631,2-二羟基蒽醌Alizarin超纯M830221克
shgoy-1364茜素红SAlizarin redFMP,50%M830235克
shgoy-1365酸性紫43Alizarin violet 3BFMPM83024100毫克
shgoy-1366间硝基苯偶氮水杨酸钠Alizarin yellow GGBSM830251克
shgoy-1367对硝基苯偶氮水杨酸Alizarin yellow R高纯,80%M830265克
shgoy-1368对硝基苯偶氮水杨酸钠Alizarin yellow R sodium saltINDM8302725克
shgoy-1369媒染蓝BAcid alizarin blue BACS级M830281克
shgoy-1370碱性蓝6BAlkali blue 6B高纯M830295克
shgoy-1371碱性蓝6B钠盐Alkali blue 6B sodium saltFMPM830305克
shgoy-1372偶氮氯磷ⅠCPA-I高纯M8303125克
shgoy-1373偶氮氯磷ⅢCPA-Ⅲ高纯,5/100mgM830325克
shgoy-1374偶氮氯磷ⅣCPA-Ⅳ色固M8303325克
shgoy-1375偶氮氯膦mACPA-mA色固M83034100克
shgoy-1376偶氮氯膦mNCPA-mNINDM830351克
shgoy-1377孔雀石绿草酸盐Malachite green oxalateBSM830365克
shgoy-1378孔雀石绿Malachite greenBR,99%M830371克
shgoy-1379坚牢蓝B盐Fast Blue B saltBR,0.5%M8303825毫克
shgoy-1380联大茴香胺3,3'-DimethoxybenzidineBR,4%M830391克
shgoy-1381联大茴香胺盐酸盐o-Dianisidine dihydrochloride高纯,98%M830405克
shgoy-1382酸性红27Amaranth高纯,95%M83041250毫克
shgoy-1383氨基紫色酸MurexideBSM830421克
shgoy-1384邻甲酚呋酞o-CresolphthaleinINDM83043100毫克
shgoy-1385酞紫o-Cresolphthalein complexonACS,50%M83044500毫克
shgoy-1386二甲酚桔黄Xylenol OrangeINDM830451克
WASP湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征相关蛋白抗体
WDR68WDR68蛋白抗体
WDR91WDR91蛋白抗体
WFDC5P53应答基因蛋白5抗体
WDR19WD重复膜蛋白19抗体
Phospho-Wee1(Ser642)磷酸化WEE1蛋白抗体
WBSCR14糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体
Wilms Tumor Protein肾母细胞瘤蛋白抗体
Wnt16信号通路Wnt16抗体
WDR23WDR23蛋白抗体
miRNA PAGE 胶回收试剂盒40 次包装TCAB1端粒酶卡哈尔体蛋白抗体
WNT10B信号通路WNT10B抗体
WAPLEBV核蛋白2抗体
Wnt receptorWnt信号受体蛋白抗体
WAVE 1富含脯氨酸同源蛋白1抗体
PPM1D原癌基因WIP1抗体
WNT2B信号通路Wnt2B抗体
WEE1 proteinWEE1蛋白抗体
WRCH-1WRCH1抗体
WNK3 protein丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员的基因WNK3抗体
WNT9A信号通路Wnt9a抗体
WISP1Wnt1信号通路蛋白1抗体
WIPF2WASP结合蛋白抗体
PAG608野生型P53诱导基因1抗体
WASF3Verprolin同源结构域包含蛋白3抗体
Wnt11信号通路Wnt11抗体
WD SOCS box protein 2信号传导抑制蛋白WD重复蛋白2抗体
WWP1WW结构域E3泛素连接酶1抗体
WDR16WD重复蛋白16抗体
WNK1赖氨酸缺陷型蛋白激酶1抗体
Phospho-Wee1(Ser123)磷酸化WEE1蛋白抗体
WIF1Wnt信号抑制因子1抗体
miRNA PAGE 胶回收试剂盒40 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。