1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1085D-(+)-麦芽糖单水合物Maltose monohydrate超纯,99%M827440.1UN
shgoy-1086半木质Xylan超纯,98%M827450.25UN
shgoy-1087壳聚糖Chitosan高纯 ,98%M827461UN
shgoy-1088水溶性壳聚糖Chitosan高纯 ,98%M8274725毫克
shgoy-1089几丁质Chitin高纯,97%M82748100毫克
shgoy-10902,4-己二烯酸Sorbic acid高纯,98%M82749500毫克
shgoy-1091棉子糖D-(+)-Raffinose pentahydrateBR,90%M827501克
shgoy-1092D-脆核糖D-RiboseBR,15~20A260单位/mgM827511毫克
shgoy-10932-脱氧-D-赤戊糖2-Deoxy-D-RiboseBR,90%M82752500U
shgoy-10942-去氧-D-葡萄糖2-Deoxy-D-glucoseBR,85%M82753100毫克
shgoy-1095D-吡喃甘露糖D-MannoseBR,50mg/mlM82754250毫克
shgoy-1096甘露醇D-MannitolBR,85%M827551毫克
shgoy-10976-脱氧-L-甘露糖L(+)-Rhamnose monohydrate高纯,90%M827565毫克
shgoy-1098环己六醇InositolBR,90%M827575毫克
shgoy-1099L-2-羟基丙酸L-(+)-Lactic acidBR,20mg/mlM82758250毫克
shgoy-1100乳酸DL-Lactic acid生物技术级,5mg/mlM827591克
shgoy-1101L-羟基琥珀酸L-Malic acidCP,99%M82760100毫克
shgoy-1102苹果酸DL-Malic acidCP,99%M827611毫克
shgoy-11031,4-二硫苏糖醇DTTCP,98%M82762250U
shgoy-1104二硫代赤藓糖醇DTE试剂级,98%M827631KU
shgoy-1105粘胶质Pectin试剂级,98%M827645克
TMEM106B跨膜蛋白106B抗体
Tau421微管相关蛋白Tau421抗体
CABP4瞬时受体电位通道蛋白4抗体
TPTE肿瘤/睾丸抗原44抗体
TACC1乳腺癌、胃癌抗原GA55抗体
TBRG4转化生长因子β调节蛋白4抗体
TYK3酪氨酸蛋白激酶3抗体
phospho-TYK3(Tyr402)磷酸化酪氨酸蛋白激酶3抗体
TRPM1瞬时受体电位离子通道蛋白1抗体(M亚家族)
TRPM6瞬时受体电位离子通道蛋白6抗体(M亚家族)
TMEM2L跨膜蛋白2样蛋白抗体
phospho-Tau protein(Ser202)磷酸化微管相关蛋白抗体
Lefty转化生长因子β4抗体TGF β4
电泳级溴酚蓝溶液10mL包装TCF12转录因子12抗体
TMP21跨膜转运蛋白21抗体
TSBP睾丸特异蛋白抗体
THAP2THAP2蛋白抗体
TRPM5瞬时受体电位离子通道蛋白5抗体(M亚家族)
TRPM4瞬时受体电位离子通道蛋白4抗体(M亚家族)
TSARG2精子形成相关凋亡蛋白2抗体
Transportin 1转运蛋白1抗体
THAP1核凋亡因子THAP1抗体
TIA1细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1抗体
THYN1胸腺细胞核蛋白1抗体
TNFAIP3 interacting protein 3肿瘤坏死因子α诱导相互作用蛋白3抗体
电泳级溴酚蓝溶液10mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。