1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-707利发霉素RifampicinBR,20u/mgM823665克
shgoy-708艾狄密新ErythromycinBR,10u/mgM823675克
shgoy-709杆菌肽锌Bacitracin zincBR,200u/mg,响尾蛇毒液M8236825克
shgoy-710枯草菌肽BacitracinBR,600-2400u/mg,蜜蜂毒液M82369100克
shgoy-711松胞菌素BCytochalasin BBR,600u/mg,猪胰M823701公斤
shgoy-712头孢霉素CTXBR,17Tabor u/mgM823711克
shgoy-713头孢菌素ⅣCephalexin monohydrateBR,500u/mgM823721毫克
shgoy-7147-(D-5-氨基-5-羧基戊酰胺基)头孢霉烷酸锌盐Cephalosporin C zinc salt超纯,95%M823731克
shgoy-715金霉素盐酸盐CTC层析纯,150u/mgM823745克
shgoy-716盐酸环丙氟哌酸Ciprofloxacin hydrochlorideBR,500u/mgM823755克
shgoy-717环丙氟哌酸CiprofloxacinBR,20u/mgM8237625克
shgoy-718环己亚胺ActidioneBR,50-100u/mgM8237710克
shgoy-719纺锤菌素Netropsin dihydrochlorideBR,50u/mgM82378100克
shgoy-720更生霉素Actinomycin DBR,95%M82379500克
shgoy-721妥布霉素TobramycinBR,3000u/mgM823801克
shgoy-722盐酸米诺环素Minocycline hydrochlorideBR,N:14%M823815克
shgoy-723氟嗪酸OFLX精制级,95%,牛奶提取M8238210克
shgoy-724两性霉素乙Amphotericin BBR,90%M82383100克
shgoy-725氨苄西林钠Ampicillin sodium saltBR,150u/mgM82384150ku
shgoy-726氨苄青霉素三水酸AmpicillinBRM82385100ku
shgoy-727盐酸林肯霉素Lincomycin hydrochlorideBR,150IU/mgM82386500ku
shgoy-728羧苄西林钠Carbenicillin disodium saltBRM8238725ku
shgoy-729左旋霉素ChloramphenicolI型,牛跟踺M82388125ku
shgoy-730湿霉素乙Hygromycin BII型,牛鼻膜M8238910u
Thymulin胸腺素抗体
α-TATα微管蛋白乙酰转移酶1抗体
TANC1TANC1蛋白抗体
TECTB遗传性耳聋β-tectorin抗体
Transglutaminase 2谷氨酰胺转胺酶2抗体
TNNI3K丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶TNN13K抗体
RNF16环指蛋白16抗体
TP-5/Thymopentin胸腺五肽抗体
TIRAP白细胞介素1受体衔接蛋白抗体
phospho-TIRAP(Tyr86)磷酸化白细胞介素1受体衔接蛋白抗体
TNIP2肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白2抗体
TReP132乳腺癌抗雌激素抵抗蛋白2抗体
Thrombomodulin凝血调节蛋白/血栓调节素抗体
TRAF3肿瘤坏死因子受体相关蛋白3抗体
TRAF6肿瘤坏死因子受体相关因子6抗体
TRIM32/BBS11神经干细胞抑制相关蛋白TRIM32抗体
TTX河豚毒素抗体
Sephadex G50 介质10mL包装TACR3速激肽受体3抗体
TFAR19凋亡相关蛋白5抗体
gamma tubulin (Centrosome Marker )微管蛋白γ/Tubulin γ抗体
TIE1血管生成素受体1抗体
phospho-Tau protein(Thr498)磷酸化微管相关蛋白抗体
TAS1R3G蛋白偶联受体TAS1R3抗体
TERT端粒酶反转录酶抗体
TOP2ADNA拓普西异构酶Ⅱ抗体
T7 tagT7 tag标签抗体
TNF-alpha(1F6)肿瘤坏死因子-α单克隆抗体
TNF alpha肿瘤坏死因子-α/TNFα抗体
TRA16睾丸激素孤儿受体相关蛋白抗体
Sephadex G50 介质10mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。