1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-3035米勒-海顿琼脂TPC
shgoy-3036米勒-海顿肉汤Isovanillic acid
shgoy-3037抗生素Ⅰ号培养基(Ph6.5~6.6)Tetrabenzyl pyrophosphate
shgoy-3038抗生素Ⅰ号培养基(Ph7.8~8.0)Indole-3-carboxaldehyde
shgoy-3039抗生素Ⅱ号培养基(Ph6.5~6.6)MIPK
shgoy-3040抗生素Ⅱ号培养基(Ph7.8~8.0)Methyl nonadecanoate
shgoy-3041抗生素Ⅲ号培养基Mesityl oxide
shgoy-3042抗生素Ⅳ号培养基Pyrimidine
shgoy-3043抗生素Ⅴ号培养基3-Amino-1,2-propanediol
shgoy-3044抗生素Ⅵ号培养基Salicyl alcohol
shgoy-3045抗生Ⅶ号培养基Deuterium oxide
shgoy-3046抗生素Ⅷ号培养基Luteolin
shgoy-3047标准平板计数琼脂培养基DEAD
shgoy-3048平板计数琼脂Dimethylphosphinic acid
shgoy-3049动力-吲哚-尿素培养基基础2,4-Pentanedione
shgoy-3050醋酸铅培养基Potassium Sulfide
shgoy-3051EF-18琼脂Menthone
shgoy-3052双岐杆菌生化基础培养基Ursolic acid
shgoy-3053营养琼脂斜面Cinchonidine
shgoy-3054月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤ACCA
shgoy-3055月桂基硫酸盐胰蛋白胨MUG培养基TTA
shgoy-3056EC肉汤12-Aminolauric acid
shgoy-3057新生霉素增菌肉汤2-Aminothiophenol
shgoy-3058mTSB肉汤Kainic acid monohydrate
PDGFBB血小板源性生长因子BB抗体
PDX1胰岛素促进因子抗体(胰十二指肠同源异型盒蛋白)
Acetyl-p53(K382)乙酰化P53(Lys382)抗体
Phospho-PPAR Gamma (ser112)磷酸化过氧化酶活化增生受体γ抗体
phospho-P53(Ser33)磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体
PACAP receptor腺苷酸环化酶激活肽受体1抗体
PADI4关节炎相关基因抗体
PAF血小板活化因子抗体
Thrombin receptor蛋白酶激活受体-1抗体
PAR-2蛋白酶激活受体-2抗体
PAR4蛋白酶活化受体4抗体
PARP1多腺苷二磷酸多聚酶抗体/多聚ADP-核糖聚合酶1
PAX3配对盒基因3抗体
PAX8配对盒基因8抗体
PAX9配对盒基因9抗体
P-cadherinP-钙粘附分子抗体
PACAP-38腺苷酸环化酶激活肽-38抗体
MnCl2溶液,25mM,PCR 级5mL包装P53 protein(wt-p53)肿瘤抑制基因P53蛋白抗体(野生型P53)
P51A肿瘤抑制基因p63α抗体
PDE4A8磷酸二酯酶4A8抗体
PDGF AB+BB血小板源性生长因子AB+BB抗体
PCNA [Proliferation Marker]增殖细胞核抗原抗体
PCP4脑特异性多肽蛋白19抗体
P2RX4三磷酸腺苷门控阳离子通道蛋白抗体
Peroxiredoxin 2硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ/巯基抗氧化蛋白抗体
p53 apoptosis effector related to PMP22p53凋亡相关作用蛋白PMP22抗体
PAICS磷酸核糖胺咪唑羧化酶抗体
MnCl2溶液,25mM,PCR 级5mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。