1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-23862,2-二羟基联苯Potassium tellurite
shgoy-23873,5-二羟基甲苯Potassium borohydride
shgoy-23881,4-二甲氧基苯Dimethylglyoxime
shgoy-23891,4-二(4-甲基-5苯基-2-咪唑)苯Diacetyl monoxime
shgoy-23904-羟基偶氮苯Acetoxime
shgoy-2391碘代苯Cyclopenta oxime
shgoy-23924-甲氧基偶氮苯Salicylaldoxime
shgoy-23931,3,5-三溴苯8-Hydroxyquinoline
shgoy-2394乙基苯Neocuproine
shgoy-23951,2,4-三甲苯7,8-Benzoquinoline
shgoy-2396邻二甲苯BCP
shgoy-2397间二甲苯Bathophenanthroline
shgoy-2398对二甲苯2,2'-Biquinoline
shgoy-23992,3-二氨基萘2-Hydroxyquinoline
shgoy-24002,2-二羟基二硫代-6,6-联萘Copper 8-quinolinonate
shgoy-24011,4-二羟基萘DMSO
shgoy-24021,5-二羟基萘MSM
shgoy-24031-溴代萘DMSO-d6
shgoy-2404四氢萘SDP
shgoy-2405锌粉Diphenyl sulfone
shgoy-2406锌粒Sulfolane
shgoy-2407锌片n-Amyl ether
shgoy-2408无砷锌粒4,4'-Azoxyanisole
Metallothionein金属硫蛋白抗体
Phospho-MAP2(Ser136)磷酸化微管相关蛋白2抗体
MMRN1内皮细胞MMRN1蛋白抗体
Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2抗体
Phospho-Met (c-Met) (Tyr1003)磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体
Phospho-Met (Tyr1234 + Tyr1235)磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体
Phospho-Mcl1 (Ser159 + Thr163)磷酸化髓样细胞白血病-1抗体
Phospho-MDM2 (Ser166)磷酸化双微体2癌基因抗体
Phospho-MEF2A (Thr312)磷酸化肌细胞增强因子2抗体
Phospho-MEF2A (Ser408)磷酸化肌细胞增强因子2抗体
phospho-MEK1 (Thr286)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1抗体
Phospho-MAP2 (Thr1620 + Thr1623)磷酸化微管相关蛋白2抗体
MAPKAP Kinase 2丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体
Phospho-MAPKAPK2 (Thr222)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体
Phospho-MAPKAPK2(Thr334)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体
Phospho-MARCKS (Ser152 + Ser156)磷酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体
Phospho-MARCKS (Ser162)磷酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体
Met (c Met)肝细胞生长因子受体抗体
phospho-MAP3K9+MAP3K10(Thr312 + Thr266)磷酸化丝裂原活化蛋白激酶3K9抗体
Taq 酶抗体1000U包装TYRO3受体酪氨酸激酶抗体
MAP3K9丝裂原活化蛋白激酶3K9抗体
MC3 Receptor黑素皮质素3受体抗体
MeninMenin抑癌蛋白抗体
MSH3错配修复蛋白3抗体
MCM7微小染色体维持缺陷蛋白7抗体
MCP-2单核细胞趋化蛋白2抗体(小鼠)
MCP-3单核细胞趋化蛋白3抗体
Taq 酶抗体1000U包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。