1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1431聚酰胺-6-薄膜TBHBA
shgoy-1432分子筛3A型NTA
shgoy-1433分子筛4A型Hematin chloride
shgoy-1434分子筛5A型4-CN
shgoy-1435分子筛13X型1-Naphtyol
shgoy-1436依斯卡合剂2-Naphthol
shgoy-1437硅镁型吸附剂Pyrocatechol
shgoy-1438717阴离子交换树脂GBHA
shgoy-1439719阴离子交换树脂4-(4-Nitrophenylazo)-1-naphthol
shgoy-1440D-201高等级大孔强碱Ⅰ型阴离子交换树脂Ninhydrin
shgoy-1441大孔吸附树脂D101Anthrone
shgoy-1442Amberlite XAD4离子交换大孔吸附树脂Thiomichler's ketone
shgoy-1443Amberlite XAD761离子交换大孔吸附树脂Michler's ketone
shgoy-1444Amberlite XAD7HP离子交换大孔吸附树脂Phenylfluorone
shgoy-1445732阳离子交换树脂PMBP
shgoy-1446熬和树脂PMP
shgoy-144796孔血凝板Phenidone
shgoy-1448移液器吸头α-Naphtholbenzein
shgoy-1449载玻片Azocarmine B
shgoy-1450盖玻片Azocarmine G
shgoy-1451乳胶手套Thionin
shgoy-1452一次性口罩 Tartrazine
shgoy-1453一次性帽子Allura Red AC
shgoy-1454一次性鞋套Sunset Yellow FCF
IRF-1干扰素调节因子1抗体
IL-6白介素6
IFI16γ干扰素诱导蛋白16抗体
Integrin Alpha V + Beta 1整合素αVβ1抗体
IL-20白细胞介素-20抗体
IFRD2 干扰素相关发育调节因子2抗体
IRAK2白介素-1受体相关激酶2抗体
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1355)磷酸化胰岛素受体β抗体
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1361)磷酸化胰岛素受体β抗体
Integrin alpha E2整合素alpha E2 抗体
Integrin Alpha V整合素αV抗体
IGBP1免疫球蛋白结合蛋白1抗体
phospho-IGF1R (Tyr1346)胰岛素样生长因子1受体抗体
IGFBPL1胰岛素样生长因子结合蛋白样1抗体
IGHD免疫球蛋白D重链保守区抗体
IGLKIV型己糖激酶抗体
IGLL1免疫球蛋白lambda样肽1抗体
phospho-IkB beta (Ser19)NF-kappa-B抑制子beta抗体
phospho-IKB epsilon (Ser22)NF-kappa-B抑制子epsilon抗体
phospho-ICK(Tyr159)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体
环状 DNA 全基因组扩增试剂盒30 次包装IFT172细胞纤毛内转运同源蛋白172抗体
ICK丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体
ICT1肽酰tRNA水解酶ICT1抗体
IFI27 alpha干扰素诱导蛋白27抗体
IFT81细胞纤毛内转运同源蛋白81抗体
IFI16Gamma干扰素诱导蛋白16抗体
IDH3B异柠檬酸脱氢酶3 beta亚基抗体
IFIT1 干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1抗体
环状 DNA 全基因组扩增试剂盒30 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。