1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-1218GST琼脂糖凝胶4BGiemsa′s Stain
shgoy-1219精氨酸琼脂糖凝胶4BHematoxylin
shgoy-1220赖氨酸琼脂糖凝胶4BNigrosine water soluble
shgoy-1221琼脂糖凝胶6BNigrosine alcohol soluble
shgoy-1222氨基琼脂糖凝胶4BChromotrope 2R
shgoy-1223羧基琼脂糖凝胶4BChromotropic acid
shgoy-1224NHS活化琼脂糖凝胶4FFChromotropic acid disodium salt dihydrate
shgoy-1225环氧琼脂糖凝胶6BPyronin Y
shgoy-1226Con A琼脂糖凝胶4BPyronin B
shgoy-1227苯甲脒琼脂糖凝胶4FFOrcein
shgoy-1228GST琼脂糖凝胶4FFSafranine T
shgoy-1229琼脂糖凝胶4FFPhenol red
shgoy-1230丁基琼脂糖凝胶4FFPhenol red sodium salt
shgoy-1231丁基琼脂糖凝胶4BCarmine
shgoy-1232辛基琼脂糖凝胶4FFFast red TR
shgoy-1233DNA纯化琼脂糖凝胶FFFast red TR Tablets
shgoy-1234DEAE琼脂糖凝胶FFFast red RC salt
shgoy-1235Q琼脂糖凝胶FFFast red GG salt
shgoy-1236羧甲基琼脂糖凝胶CL-6BFuchsin basic
shgoy-1237羟甲基琼脂糖凝胶FFFuchsin acid
shgoy-1238SP琼脂糖凝胶FFRT
shgoy-1239镍NTA琼脂糖凝胶6FFTV
shgoy-1240螯合琼脂糖凝胶FFBT
T7 体外转录试剂盒50 次包装phospho-IKK gamma (Ser376)磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗体
phospho-IKK beta(Ser466)磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗体
IFI6干扰素alpha诱导蛋白6抗体
IL-17E/IL-25白介素-17E抗体
phospho-IRS-1(Ser307)磷酸化胰岛素受体底物p-IRS-1/2抗体
IARS2tRNA异亮氨酸连接酶抗体
Integrin alpha 2/CD49b整合素α2抗体
IFIT3干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白3抗体
IFIT5干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白5抗体
IFITM2干扰素诱导跨膜蛋白2抗体
IFITM5干扰素诱导跨膜蛋白5抗体
phospho-IFNAR1(Tyr466) 干扰素alpha/beta 受体1蛋白抗体
phospho-IFNGR1 (Tyr457)干扰素gamma受体1蛋白抗体
IF3EI 真核翻译起始因子3亚基L蛋白抗体
IFIT2干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白2抗体
IFIT1B 干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1B抗体
IBP160160kDa内含子结合蛋白抗体
IBTKBruton酪氨酸激酶抑制剂蛋白抗体
IFI30γ干扰素诱导蛋白IP30抗体
IFFO中间丝家族孤啡肽1蛋白抗体
Inversin内脏器官发育转位相关蛋白NPH2抗体
Insulin receptor subunit beta胰岛素受体β抗体
ITLN1内皮细胞凝集素HL1抗体
IFN-Alpha干扰素α抗体
IL-17F白介素-17F抗体
IL-6 (NT)白介素6抗体(N端)
IL-6白介素6抗体
IFNE1干扰素epsilon 1蛋白抗体
phospho-IKK gamma(Ser43)磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗体
T7 体外转录试剂盒50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。