1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-7005-胞苷二磷酸单钠盐PUC19质粒
shgoy-7015-胞苷二磷酸二钠盐 Haptoglobin from pooled human plasma
shgoy-7025-胞苷三磷酸二钠盐Lipids-Remover from proteins
shgoy-7035-胞苷三磷酸三钠盐Oxyhemoglobin
shgoy-7045-胞苷三磷酸四钠盐溶液Prionex
shgoy-7055-尿苷一磷酸Ub
shgoy-7065-尿苷一磷酸二钠盐α-Lactalbumin
shgoy-7075-尿苷二磷酸Rifampicin
shgoy-7085-尿苷二磷酸二钠盐Erythromycin
shgoy-7095-尿苷三磷酸三钠盐Bacitracin zinc
shgoy-7105-尿苷三磷酸四钠盐Bacitracin
shgoy-711尿苷二磷酸葡糖醛酸Cytochalasin B
shgoy-712尿苷二磷酸葡萄糖CTX
shgoy-7135-鸟苷一磷酸二钠盐Cephalexin monohydrate
shgoy-7145-鸟苷二磷酸二钠盐Cephalosporin C zinc salt
shgoy-7155-鸟苷三磷酸二钠盐CTC
shgoy-7165-鸟苷三磷酸三钠盐Ciprofloxacin hydrochloride
shgoy-717鸟苷-3',5'-环磷酸钠盐Ciprofloxacin
shgoy-7185-肌苷一磷酸二钠盐Actidione
shgoy-7195-肌苷二磷酸三钠盐Netropsin dihydrochloride
shgoy-7205-肌苷三磷酸三钠盐Actinomycin D
HE4附睾分泌蛋白4抗体
加 A 试剂盒50 次包装HBLD1铁硫簇整合同源物2蛋白抗体
HIGD2AHIG1区域家族成员2A抗体
Hpt/Haptoglobin结合珠蛋白/触珠蛋白抗体
HMGB4高迁移率族蛋白B4抗体
Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1硫酸肝素糖蛋白1抗体抗体
HFH-4叉头蛋白J1抗体
HIV p55+NP7艾滋病病毒抗体
HIV p55+P6-Gag艾滋病病毒抗体
HIV1 p55+p17艾滋病病毒抗体
HPR结合珠蛋白相关蛋白抗体
HDCL-组氨酸脱羧酶抗体
HBXIP乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白
Histone H2B.s组蛋白H2B.s抗体
HDAC4 + 5 + 9组蛋白去乙酰化酶4+5+9抗体
HSPBAP1热休克蛋白27相关蛋白1抗体
HMBS卟胆原脱氨酶抗体
HORMAD2异质核糖核蛋白U2样蛋白抗体
HRP2肝癌衍生生长因子2抗体
HCA57肝癌相关抗原57抗体
Complement C3补体C3抗体
H1N1 Hemagglutinin 2甲型流感病毒血凝素抗体
HRPT2甲状旁腺功能亢进蛋白2/细胞分裂周期73抗体
HTRA2线粒体丝氨酸蛋白酶抗体
HCN2钾/钠超极化激活环核苷酸门控通道蛋白2抗体
HSPβ7热休克蛋白β7抗体
HCN3钾/钠超极化激活环核苷酸门控通道蛋白3抗体
Hepcidin-25铁调节蛋白25抗体
HDDC2HD域内含蛋白2抗体
HIV1 p55 + p17艾滋病病毒p55抗体
加 A 试剂盒50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。