1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-415胰蛋白酶抑制剂Fmoc-Cys(Acm)-OH
shgoy-416抑肽酶(牛肺)Fmoc-His(Trt)-OH
shgoy-417AMV反转录酶Fmoc-N-Me-Val-OH
shgoy-418M-MLV反转录酶Fmoc-Tyr(tBu)-OH
shgoy-419Super Script Ⅱ阴性逆转录酶Fmoc-Thr(tBu)-OH
shgoy-420碱性磷酸酶N-Hippuryl-His-Leu hydrate
shgoy-421尿素酶(巨豆)O-Acetyl-L-serine hydrochloride
shgoy-422亮抑肽酶DSC
shgoy-423硫代氧化型辅酶I10% Iron chelate
shgoy-424氧化型辅酶ⅠDL-Homocysteine
shgoy-425还原辅酶Ⅰ二钠盐Fmoc-Arg(Mtr)-OH
shgoy-426还原辅酶Ⅰ抑制剂Fmoc-Arg(Pbf)-OH
shgoy-427氧化型辅酶ⅡFmoc-Glu(OtBu)-OH
shgoy-428还原辅酶Ⅱ四钠盐Glycine tert butyl ester hydrochloride
shgoy-429辅羧酶Potassium L-glutamate
shgoy-430辅酶A2-Amino-1-phenylethanol
shgoy-4313C蛋白酶cis-4-Hydroxy-D-proline
shgoy-432溶壁酶DON
shgoy-433木聚糖酶L-(+)-Selenomethionine
shgoy-434抗坏血酸氧化酶AdoMet
shgoy-435乙醇脱氢酶L-Homocystine
shgoy-436崩溃酶L-Cystathionine
shgoy-437黄嘌呤氧化酶Cys-Gly
shgoy-438超氧化物歧化酶ε-PL
Glycogen葡萄糖合成酶1抗体
GPATCH8G蛋白修补结构域蛋白8抗体
GK3甘油激酶3抗体
GOLPH3L高尔基体磷蛋白3样蛋白抗体
phospho-GluR1 (Ser849)磷酸化谷氨酸受体1抗体
GPATCH1/ECGPG蛋白修补结构域蛋白1抗体
phospho-GIT1(Tyr510) 磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1抗体
phospho-GIT1(Tyr554) 磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1
GKRP葡萄糖激酶调节蛋白抗体
GTPBP10GTP结合蛋白10抗体
phospho-G3BP1(Ser232)磷酸化Ras GTP酶活化蛋白结合蛋白1抗体
G3BP1Ras GTP酶活化蛋白结合蛋白1抗体
GABA A Receptor gamma 2γ氨基丁酸γ2受体/GABAA Rγ2抗体
phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29)磷酸化糖原合酶激酶3β抗体
phospho-GIT1(Ser375)磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1抗体
phospho-GATA1(ser142)磷酸化珠蛋白转录因子1抗体
可保种型蓝白 T 载体50ng包装phospho-GATA1(ser310)磷酸化珠蛋白转录因子1抗体
GIT1G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1抗体
phospho-GATA6(Tyr271)磷酸化GATA结合蛋白6抗体
phospho-GABRG2(Ser327)磷酸化γ氨基丁酸γ2受体/GABAA Rγ2抗体
Glucagon Receptor胰高血糖素受体抗体
GDF3生长分化因子3抗体
phospho-GSK-3 Beta(Ser21)磷酸化糖原合酶激酶3β抗体
GPR1G蛋白偶联受体1抗体
G protein beta 1G蛋白β1抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚基1
G protein beta 3G蛋白β3抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚基3
GMPR2鸟苷酸还原酶2抗体
G gamma12G蛋白偶联受体γ12抗体
GRAP2生长因子受体结合蛋白2相关接头蛋白2抗体
GNAQG蛋白α亚单位蛋白Q抗体
可保种型蓝白 T 载体50ng包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。