1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-3024茴香醛英文名称:Anisic aldehyde规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3025苯甲酰次乌头原碱英文名称:Benzoyl?times?aconine规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3026苯甲酰新乌头原碱英文名称:Benzoyl?new?aconine规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3027苯甲酰乌头原碱英文名称:Benzoyl?aconine规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3028粉防己碱英文名称:The effects of tetrandrine规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3029吴茱萸碱英文名称:Evodiamine规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3030吴茱萸次碱英文名称:Wu Zhuyu?alkali规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3031吴茱萸新碱、吴茱萸卡品碱、吴茱萸喹酮碱英文名称:Wu Zhuyu?new?alkali,?alkali,?Wu Zhuyu?Wu Zhuyu?card?praziquantel?alkali规格:HPLC≥98% 10mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3032山奈酚英文名称:Kaempferol规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3033莽草酸英文名称:Shikimic acid规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3034丹参酮 I英文名称:Tanshi I规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3035二氢丹参酮Ⅰ英文名称:Two hydrogen?tanshi I规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3036丹参酮IIA-磺酸钠英文名称:Sodium tanshi IIA- sulfonate规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3037隐丹参酮英文名称:Cryptotanshi规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3038丹酚酸A英文名称:Salvianolic?acid A规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3039丹酚酸B英文名称:Salvianolic?acid B规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3040丹酚酸C;丹参酚酸C英文名称:Salvianolic acid C;?salvianolic acid C规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3041丹参素英文名称:Danshensu规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3042丹参新酮英文名称:Salvia miltiorrhiza规格:HPLC≥98% 5mg/支保存:-20℃,避光
shgoy-3043丹参素钠英文名称:Sodium Danshensu规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
FAM62C延伸突触蛋白3抗体
Fibrillin 2原纤维蛋白2抗体
Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10包装FLI1尤文肉瘤FLI1蛋白抗体
FUT1岩藻糖转移酶1抗体
FLIP delta + gamma凋亡调节蛋白δ+γ抗体
FOXO1 + FOXO3 + FOXO4叉头蛋白O1/O3/O4抗体
FAM82B微管相关蛋白FAM82B抗体
Fibrinogen alpha chain纤维蛋白原A链抗体
FAIM1FAS凋亡抑制分子1抗体
FAIM2FAS凋亡抑制分子2
Flotillin 2表皮细胞表面抗原1抗体
Factor IX凝血因子9抗体
Factor X凝血因子10抗体
Factor XI light chain凝血因子11轻链抗体
Factor XII heavy chain凝血因子12重链抗体
FIGNL1FIGNL1蛋白抗体
FAM70AFAM70A蛋白抗体
FIBCD1含纤维蛋白原C结构域蛋白1抗体
FbxO6F-box蛋白相关蛋白6抗体
phospho-FRS2(Tyr436)磷酸化成纤维细胞生长因子受体底物2抗体
FEZ2椎骨蛋白2抗体
Factor VII light chain凝血因子VII
Factor X heavy chain凝血因子10抗体
AFF2脆性X综合征相关蛋白AFF2抗体
Tuner(DE3) 感受态细胞0.1mL×10包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。