1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2133硝酸异山梨酯英文名称:Isosorbide dinitrate规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2134消旋山莨菪碱英文名称:Racemic Anisodamine规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2135鱼腥草素钠英文名称:Sodium Houttuyfonate规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2136羧甲司坦英文名称:Carbocisteine规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2137色甘酸钠英文名称:Cromolyn sodium规格:1000mg保存:-20℃,避光
shgoy-2138双嘧达莫英文名称:Dipyridamole规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2139石杉碱甲英文名称:Huperzine A规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2140十一酸睾酮英文名称:Eleven acid?testosterone规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2141羟甲香豆素英文名称:Hymecromone规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2142盐酸英文名称:Strychnine hydrochloride规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2143尼尔雌醇英文名称:Neal female?alcohol规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2144米诺地尔英文名称:Minoxidil规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2145磷酸苯丙哌啉英文名称:Benproperine phosphate规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2146溶液英文名称:Nitroglycerin solution规格:1.0ml保存:-20℃,避光
shgoy-2147己内酰胺英文名称:Caprolactam规格:50mg保存:-20℃,避光
shgoy-2148环磷酰胺英文名称:Cyclophosphamide规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2149环己胺英文名称:Cyclohexylamine规格:100mg保存:-20℃,避光
shgoy-2150环吡酮胺英文名称:Ciclopirox olamine规格:50mg保存:-20℃,避光
Phospho-DARPP32 (Thr75)磷酸化多巴胺/cAMP调节磷蛋白抗体
Phospho-Doublecortin (Ser128)磷酸化双皮质素抗体
Phospho-Dab1 (Tyr220)磷酸化Disabled 1抗体
Phospho-Dab1 (Tyr232)磷酸化Disabled 1抗体
Phospho-Dab1 (Ser491)磷酸化Disabled 1抗体
Doublecortin双皮质素抗体
DOK2D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体
Phospho-DOK2 (Tyr351)磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体
Phospho-DOK2 (Tyr299)磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体
Phospho-DOK2 (Tyr142)磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体
DBC1/deleted in bladder cancer 1膀胱癌缺失基因1
Phospho-DBC1 (Tyr454)磷酸化膀胱癌缺失基因1抗体
动植物总蛋白微量提取试剂盒50 次包装DRD4多巴胺受体D4抗体
DP-I桥粒斑蛋白1抗体
DP-II桥粒斑蛋白2抗体
DRD5多巴胺受体D5抗体
dUTPase脱氧尿嘧啶三磷酸核苷水解酶抗体
DRD3多巴胺受体D3抗体
DcR3诱捕受体3抗体
DAT多巴胺转运蛋白DAT抗体
DcR2诱捕受体2抗体
DR5肿瘤细胞调亡素/死亡受体5抗体
DCN/Decorin 核心蛋白聚糖抗体
DUSP2双特异性磷酸酶2抗体
C21orf10621号染色体开放阅读框106抗体
Dlx5同源转录因子DLX5抗体
动植物总蛋白微量提取试剂盒50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。